Question

【題目】凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質(zhì)有很好的分離效果，目前已被生物化學(xué)，分子免疫學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

（1）凝膠色譜法是根據(jù)_____________分離蛋白質(zhì)的有效方法，也稱作_____。

（2）樣品處理中紅細(xì)胞的洗滌要使用_____反復(fù)沖洗、離心，直到__________， 表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。實驗流程圖中 A 操作要用到的試劑是_____。

（3）血紅蛋白粗分離階段，透析的目的是_____________。

（4）甲圖中，實驗流程 B 代表_____。進行乙圖操作時，如果_________，說明色譜柱制作成功。其中，C 試劑是_________。

Answer 1

【答案】相對分子質(zhì)量的大小 分配色譜法 生理鹽水 上清液中沒有黃色 蒸餾水和甲苯 除去小分子雜質(zhì) 樣品的加入和洗脫 紅色區(qū)帶均勻一致地移動 磷酸緩沖液

【解析】

1、血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白。（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)。（4）純度鑒定——SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

2、凝膠色譜法（分配色譜法）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。

3、據(jù)圖A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫。

（1）凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，也稱作分配色譜法。

（2）樣品處理中紅細(xì)胞的洗滌要使用生理鹽水反復(fù)沖洗、離心，直到離心后的上清液中沒有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。實驗流程圖中A血紅蛋白的釋放操作要用到的試劑是蒸餾水和甲苯。

（3）血紅蛋白粗分離階段，透析的目的是除去小分子雜質(zhì)。

（4）甲圖中，實驗流程B代表樣品的加入和洗脫，進行乙圖操作時，如果紅色區(qū)帶，說明色譜柱制作成功。其中，C試劑是20mmol/L的磷酸緩沖液。