Question

【題目】來源于某種野生植物的A基因表達(dá)出的多肽對(duì)多種致病微生物具有殺滅作用，將A基因?qū)�入油菜可顯著提高油菜的抗病能力。

（1）下圖是含目的基因A的DNA分子，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增A基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成___________。PCR—般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，在第3輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段，這種DNA片段所占的比例為___________。

（2）通過SmaⅠ酶切割擴(kuò)增后的DNA分子和質(zhì)粒，利用___________酶連接切割后的DMA分子和質(zhì)粒，將A基因插入質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間，構(gòu)建___________。

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將A基因?qū)�入�?jīng)___________形成的油菜愈傷組織細(xì)胞，在愈傷組織進(jìn)一步培養(yǎng)過程中，MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加質(zhì)量濃度為0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于________的分化。

（4）經(jīng)檢測(cè)，轉(zhuǎn)入完整A基因的某些植物不能正確表達(dá)多肽，從A基因與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒的角度分析，最可能的原因是_________________________________。

Answer 1

【答案】 引物 1/4 DNA連接 （基因）表達(dá)載體 脫分化（去分化） 根 部分A基因與質(zhì)粒反向連接

【解析】試題分析：根據(jù)題干信息可知，本題涉及到基因工程的基本步驟的考查，其中A基因?yàn)槟康幕�因，表達(dá)產(chǎn)物可以控制顯著提高油菜的抗病能力；常用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；基因工程常用的工具酶有限制酶和DNA連接酶；將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。

（1）在PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程中，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物；第3輪循環(huán)獲得8個(gè)DNA片段，其中兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段有2個(gè)，因此在第3輪循環(huán)產(chǎn)物中兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段所占的比例為1/4。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)該先用限制酶切割含目的基因的DNA分子和質(zhì)粒，再用DNA連接切割后的DMA分子和質(zhì)粒，連接成重組質(zhì)粒。

（3）油菜的愈傷組織細(xì)胞是經(jīng)過脫分化形成的；在愈傷組織進(jìn)一步培養(yǎng)過程中，MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加質(zhì)量濃度為0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于根的分化。

（4）轉(zhuǎn)入完整A基因的某些植物不能正確表達(dá)多肽，從A基因與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒的角度分析，最可能的原因是部分A基因與質(zhì)粒反向連接。