Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答以菊花莖段為材料進行組織培養(yǎng)的有關(guān)問題：

（1）在配制MS培養(yǎng)基時，通常先將各種藥品配制成濃度為配方5~10倍的__________，這樣配制的主要優(yōu)點是__________（A 便于低溫保存 B 延長使用時間 C 降低稱量誤差 D 減少雜菌污染）。從培養(yǎng)基的作用看，在MS培養(yǎng)基中定量添加BA和NAA后的培養(yǎng)基屬于___________培養(yǎng)基。

（2）從自然界中獲取的菊花莖段，須先用70%乙醇等進行消毒，最后用__________進行清洗。將莖段插入培養(yǎng)基的過程須在______中的酒精燈火焰旁進行，以保證無菌環(huán)境。

（3）從帶芽的莖段上長出叢狀苗____________（填“需要”或“不需要”）經(jīng)歷脫分化，長出的叢狀苗需__________后，再轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。

（4）實驗中選用BA和NAA而不用植物中存在的天然激素的原因是_____________________。

（二）腺病毒能引起人呼吸系統(tǒng)不適等癥狀，但致死率低。研究發(fā)現(xiàn)該病毒可作為基因工程的載體。陳薇等科學(xué)家研發(fā)了以人5型腺病毒（Ad5）為載體的重組新冠疫苗，這是國內(nèi)第一個進入臨床試驗階段的新冠疫苗。腺病毒載體疫苗生產(chǎn)過程示意圖如下：

回答下列問題：

（1）在制備人腎上皮細胞系（293細胞）時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)一段時間，細胞鋪滿培養(yǎng)瓶后不再分裂，這種現(xiàn)象稱為__________。出現(xiàn)此現(xiàn)象后，需用__________處理，得到細胞懸液，再進行__________培養(yǎng)，以獲得更多的293細胞。

（2）新冠病毒為RNA病毒，其遺傳物質(zhì)不能直接拼接到質(zhì)粒上，因此在制備以上疫苗時需先通過___________過程獲得相應(yīng)的DNA。構(gòu)建重組腺病毒穿梭質(zhì)粒，可使用雙酶切法，使之產(chǎn)生__________的粘性末端，以提高目的基因與質(zhì)粒重組的成功率。據(jù)圖可知需將___________導(dǎo)入293細胞，從而獲得轉(zhuǎn)基因腺病毒。

（3）檢測轉(zhuǎn)基因腺病毒攜帶的目的基因是否在人體細胞內(nèi)表達，可檢測細胞內(nèi)是否含有相應(yīng)的__________或抗原分子，若檢測抗原分子可用__________技術(shù)獲得特異性探針。

Answer 1

【答案】母液 C 發(fā)芽（生芽） 無菌水 超凈臺 不需要 分株 BA和NAA是人工合成激素，植物沒有相關(guān)分解酶，作用時間長，效果明顯 接觸抑制 胰蛋白酶 傳代 逆轉(zhuǎn)錄 不同 重組腺病毒穿梭質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒 mRNA 單克隆抗體制備

【解析】

1、植物組織培養(yǎng)的過程：離體的植物組織、器官或細胞（外植體）脫分化形成愈傷組織，再分化形成胚狀體，最后長出完整植株（新植體）。

2、植物組織培養(yǎng)的條件：①細胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時的光照、pH和無菌環(huán)境等）；②一定的營養(yǎng)（無機、有機成分）和植物激素（生長素和細胞分裂素）。決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要，被稱為“激素杠桿”。

3、動物細胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4、基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成；（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（一）（1）MS培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和有機成分組成，也可將大量元素、微量元素和有機成分分別配制成濃度為配方的5~10倍的母液，用時稀釋，這樣配制的主要優(yōu)點是降低稱量誤差（即C）。MS培養(yǎng)基中定量添加BA和NAA后的培養(yǎng)基屬于發(fā)芽培養(yǎng)基，MS培養(yǎng)基中定量添加NAA后的培養(yǎng)基屬于生根培養(yǎng)基。

（2）從自然界中獲取的菊花莖段，須先用70%乙醇等進行消毒，再放入5%次氯酸鈉溶液浸泡，然后用另一5%次氯酸鈉溶液浸泡，最后在超凈臺中用無菌水清洗，將莖的切斷培養(yǎng)在生芽培養(yǎng)基中。

（3）從帶芽的莖段上長出叢狀苗不需要經(jīng)歷脫分化，長出的叢狀苗需要分株后，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。

（4）實驗中使用的是人工合成的BA和NAA，是由于植物沒有相關(guān)分解酶，作用時間長，效果明顯。

（二）（1）細胞鋪滿瓶壁時，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，此時需要胰蛋白酶處理，得到細胞懸液，再進行傳代培養(yǎng)，已獲得更多的細胞。

（2）新冠病毒是單鏈的RNA病毒，而質(zhì)粒是雙鏈的DNA，因此需要將RNA通過逆轉(zhuǎn)錄得到相應(yīng)的DNA才能拼接到質(zhì)粒上。構(gòu)建重組腺病毒穿梭質(zhì)粒，使用雙酶切法產(chǎn)生不同的粘性末端，這樣可以避免目的基因和質(zhì)粒自身連接以及目的基因和質(zhì)粒反向連接，提高目的基因與質(zhì)粒重組的成功率。據(jù)圖可知需將重組腺病毒穿梭質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒導(dǎo)入受體細胞293細胞內(nèi)。

（3）基因的表達包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個過程，因此檢測目的基因是否在人體細胞內(nèi)表達，可檢測細胞內(nèi)是否含有相應(yīng)的mRNA或抗原分子，檢測抗原分子的方法是抗原-抗體雜交法，可用單克隆抗體制備技術(shù)獲得特異性探針。