Question

【題目】Ⅰ:狂犬病是由狂犬病病毒引起的人畜共患的烈性傳染病，制備鼠源性抗狂犬病病毒單克隆抗體是檢測(cè)狂犬病病毒、治療狂犬病的有效措施之一。請(qǐng)回答下列問題：

（1）用狂犬病病毒的RRIG蛋白免疫小鼠，一段時(shí)間后，若小鼠血清中檢出_________的抗體，則說明小鼠產(chǎn)生了免疫反應(yīng)。再?gòu)男∈笃⒓?xì)胞中獲取______，然后將其一與骨髓瘤細(xì)胞融合。

（2）在細(xì)胞融合完成后，篩選出雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是_____

Ⅱ:轉(zhuǎn)基因抗病甜椒的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有Pst I、Sina I、EcoR I、 Apa I等四種限制酶切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答：

（1）構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶_________，對(duì)含抗病基因的DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割。

（2）通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞時(shí)，受體應(yīng)選_____（填“正常葉”或“損傷葉”)，原因是 ____________。

（3）培養(yǎng)基中的卡那霉素會(huì)抑制甜椒愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，欲利用該培養(yǎng)基篩選己導(dǎo)入抗病基因的甜椒細(xì)胞，應(yīng)使A中含有________，作為標(biāo)記基因。

Answer 1

【答案】抗RRIG蛋白 B淋巴細(xì)胞 無限增殖且能產(chǎn)生專一性抗體 PstⅠ、EcoRⅠ 損傷葉 植物受到損傷時(shí)傷口處細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞 抗卡那霉素基因

【解析】

1.基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上。

Ⅰ. （1）用狂犬病毒的RRIG蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，若在血清中產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，則可從小鼠的脾臟細(xì)胞中得到產(chǎn)生該抗體的B淋巴細(xì)胞。

（2）B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，再用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在培養(yǎng)基上未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡。只有融合的細(xì)胞才能生長(zhǎng)，這種雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是既能無限增殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。

（3）單克隆抗體的特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備。

Ⅱ．（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，但限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于抗病基因上，對(duì)SmaⅠ位點(diǎn)進(jìn)行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ對(duì)圖中對(duì)應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割，要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)選用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶對(duì)含抗病基因的DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割。

（2）通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞時(shí)，受體應(yīng)選損傷葉，這是因?yàn)橹参锸艿綋p傷時(shí)傷口處細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，增大導(dǎo)入成功率。

（3）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的甜椒細(xì)胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時(shí)含有抗卡那霉素基因，作為標(biāo)記基因。