Question

【題目】基因工程與微生物

如圖1表示制備抗體的兩個途徑的模式圖。圖2是圖1普通質粒的放大，其上有3種限制酶的酶切位點，復制原點是質粒復制不可或缺的序列。

（1）下列關于Y細胞的敘述，錯誤的是______。

A．Y細胞是雜交瘤細胞

B．既能產生單一抗體，又能在體外快速增殖

C．圖1中過程①使用的是細胞融合技術

D．Y細胞的增殖需要細胞分裂素

（2）據圖1分析，下列敘述中正確的有______。（多選）

A．制備抗體2的途徑中，目的基因是V1基因

B．圖示獲取目的基因的方法是化學方法人工合成

C．獲得Y細胞的過程不需要篩選

D．抗體1和抗體2的結構不完全相同

（3）限制酶可用于基因工程中的______。（多選）

A．獲取目的基因

B．重組DNA分子導入受體細胞

C．目的基因與運載體重組

D．篩選含目的基因的受體細胞

（4）據圖2，綜合考慮基因工程的步驟，若只能選擇一種限制酶切割質粒，該限制酶應是______，寫出你作出判斷的理由：______。

（5）為篩選圖1中的大腸桿菌，采用的培養(yǎng)基部分成分如表。下列敘述錯誤的是______。

牛肉膏	0.5g
蛋白胨	1g
NaCl	0.5g
瓊脂	2g
水	200mL

A．此培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基

B．篩選時需要用到氨芐青霉素和新霉素

C．配制此培養(yǎng)基需要高壓滅菌

D．培養(yǎng)基配制過程中應先調pH再定容

Answer 1

【答案】D ABD AC PstI BamHI會破壞復制原點，導致質粒無法復制且無法篩選；EcoRI能破壞標記基因，導致后續(xù)無法篩選 D

【解析】

1、據圖1分析，細胞A表示效應B細胞，細胞Y表示雜交瘤細胞，結構甲表示基因表達載體，①過程表示動物細胞融合，②過程表示雜交瘤細胞的培養(yǎng)，③過程表示提取信使RNA，④過程表示逆轉錄，⑤表示基因表達載體的構建，⑥表示導入受體細胞。

2、分析圖2可知，該質粒上存在上限制酶的酶切位點，即限制酶PstI、限制酶BamHI和限制酶EcoRI，但是BamHI的識別序列位于復制原點內，一旦用其切割會破壞復制原點，導致質粒無法復制且無法篩選；EcoRI的識別位點位于標記基因內，切割后會破壞標記基因，導致后續(xù)無法篩選，因此選擇限制酶PstI進行酶切不會影響載體的功能。

3、分析表格中培養(yǎng)基的成分可知，含有瓊脂，瓊脂屬于凝固劑，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的配制流程：計算→稱量→溶化→調pH→滅菌→倒平板。

培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

（1）由圖1可知，細胞Y表示雜交瘤細胞，但Y細胞的增殖不需要細胞分裂素。

（2）據圖1分析，下列敘述中正確的有制備抗體2的途徑中，目的基因是V1基因；圖示獲取目的基因的方法是化學方法人工合成；抗體1和抗體2的結構不完全相同。獲得Y細胞的過程需要篩選。

（3）限制酶可用于基因工程中的獲取目的基因、目的基因與運載體重組兩個過程。

（4）切割質粒時要保證目的基因和復制原點不被破壞，因此選擇限制酶PstI酶切割較為理想。據圖2可知，BamHI會破壞復制原點，導致質粒無法復制且無法篩選；EcoRI能破壞標記基因，導致后續(xù)無法篩選。

（5）為篩選圖1中的大腸桿菌，采用的培養(yǎng)基部分成分如表，根據表格結果分析，培養(yǎng)基配制過程中應先定容后再調pH值，即D錯誤。