Question

【題目】下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三種限制酶。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）從高表達(dá)人乳鐵蛋白的組織細(xì)胞中提取mRNA，通過(guò)______過(guò)程獲得cDNA，用于PCR擴(kuò)增。

（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用______限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌，首先需要在含______的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是_____（填字母代號(hào)）。

A．啟動(dòng)子 B．tetR C．復(fù)制原點(diǎn) D．ampR

（4）進(jìn)行過(guò)程②之前，需用相應(yīng)的激素處理代孕牛，使其處于______狀態(tài)。

（5）對(duì)早期胚胎進(jìn)行切割，可獲得多個(gè)新個(gè)體，該種生殖方式屬于_____生殖。

（6）為檢測(cè)人乳鐵蛋白基因是否轉(zhuǎn)錄，可采用______技術(shù)。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 BamHⅠ和HindⅢ 氨芐青霉素 A 同期發(fā)情 無(wú)性生殖（克隆） （DNA—RNA）分子雜交

【解析】

分析題圖：圖示是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線，包括基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過(guò)程①是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞；過(guò)程②需采用胚胎移植技術(shù)。

（1）以mRNA為模板合成DNA的過(guò)程稱為逆轉(zhuǎn)錄。
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、Hindlll、Smal的切割位點(diǎn)，其中限制酶Smal的切割位點(diǎn)位于目的基因上，所以獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用限制酶HindⅢ和BamHI。用限制酶HindⅢ和BamHI切割質(zhì)粒后，會(huì)破壞質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行。
（3）啟動(dòng)子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列，A正確。故選A。
（4）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；進(jìn)行胚胎移植前，需要用相應(yīng)的激素處理代孕牛，使其處于同期發(fā)情狀態(tài)。
（5）來(lái)自同一個(gè)胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此胚胎分割可以看做動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一。
（6）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄常用分子雜交技術(shù)。