Question

【題目】（三）回答下列有關(guān)微生物與基因工程有關(guān)的問(wèn)題

【1】基因工程的第一步是獲取目的基因，獲取的方法包括__________和化學(xué)方法人工合成。如果要想獲取人的胰島素基因，只能用化學(xué)方法人工合成，具體的做法是從人體__________細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過(guò)__________過(guò)程即可獲得目的基因。

【2】基因工程的第二步是將目的基因和運(yùn)載體重組，重組時(shí)需要選擇合適的限制酶和________酶。常用的運(yùn)載體是細(xì)菌質(zhì)粒（如圖示），

質(zhì)粒中ori為質(zhì)粒復(fù)制所必需的DNA序列，啟動(dòng)子是使轉(zhuǎn)錄開(kāi)始的一段DNA序列，終止子是提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列。青霉素抗性基因作為__________基因，以便于篩選。質(zhì)粒上還有多種限制酶的切點(diǎn)，若目的基因上也有上述質(zhì)粒中相應(yīng)限制酶的切點(diǎn)，為避免目的基因自身的環(huán)化并能與圖中質(zhì)粒準(zhǔn)確重組，可選用的限制酶是____

A. NdeI和XbaI B. NdeI和BamHI C. XbaI D. PstI E. BamHI

【3】基因工程的第三步是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，例如，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的受體細(xì)胞為____________。

【4】基因工程的第四步是篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。

（1）如用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，則該大腸桿菌中不應(yīng)含有青霉素抗性基因，請(qǐng)闡述其原因？_______________________________________________________。

（2）培養(yǎng)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌時(shí)，需配制培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入的物質(zhì)有____（多選）

A. 細(xì)胞分裂素 B. 瓊脂 C. 噬菌體 D. 青霉素

Answer 1

【答案】

【1】從某種生物體細(xì)胞中分離胰島B逆轉(zhuǎn)錄

【2】DNA連接標(biāo)記B

【3】受精卵

【4】若含有則會(huì)干擾篩選BD先調(diào)節(jié)pH后滅菌高壓滅菌涂布法劃線法AC

【解析】本題考查基因工程、微生物的培養(yǎng)，考查對(duì)基因工程操作程序、培養(yǎng)基種類(lèi)和配制方法的理解和識(shí)記。

【1】獲取目的基因的方法包括從某種生物體細(xì)胞中分離和化學(xué)方法人工合成。獲取人的胰島素基因，可以從人體胰島B細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程即可獲得目的基因。

【2】將目的基因和運(yùn)載體重組時(shí)需要選擇合適的限制酶和DNA連接酶，以保留ori、啟動(dòng)子、終止子，同時(shí)保留青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，以便于篩選。為避免目的基因自身的環(huán)化并能與圖中質(zhì)粒準(zhǔn)確重組，應(yīng)選用兩種不同的限制酶，可選用的限制酶是NdeI和BamHI，選擇NdeI和XbaI會(huì)導(dǎo)致終止子被切除。

【3】由于分化的動(dòng)物體細(xì)胞難以表達(dá)全能性，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的受體細(xì)胞為受精卵。

【4】（1）根據(jù)質(zhì)粒上的青霉素抗性基因在大腸桿菌中是否表達(dá)判斷目的基因是否進(jìn)入大腸桿菌，若大腸桿菌中含有青霉素抗性基因，則會(huì)干擾篩選。

（2）篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)使用固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還需加入瓊脂和青霉素。

（3）培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)PH的先后順序是先調(diào)節(jié)PH后滅菌；一般對(duì)配置的培養(yǎng)液采用高壓法滅菌。

（4）據(jù)圖可知獲得圖A效果的接種方法涂布法，獲得圖B效果的接種方法是劃線法。

（5）嗜熱菌耐高溫的原因是細(xì)胞的DNA中堿基G和C含量較高，氫鍵較多，所以DNA較穩(wěn)定。