Question

【題目】S多肽是構成乙肝病毒的主要成分，現利用基因工程制造乙肝疫苗．回答下列問題：
（1）利用PCR技術擴增S基因前，需根據S基因的核苷酸序列設計種引物，進行PCR時需加熱至90～95℃然后冷卻至55～60℃，此操作的目的是 ．
（2）將S基因插入Ti質粒中（如圖所示）構建基因表達載體時，需要在S基因前后兩端分別引入的酶切位點，目的是（答出一點即可）．
（3）用分子雜交技術檢測S基因是否轉錄出mRNA的具體操作過程是 ， 若 ， 則表明轉錄出了mRNA．
（4）乙肝疫苗的接種需要在一定時期內間隔注射3次，其目的是使機體產生更多的 ．

Answer 1

【答案】
（1）2（兩）；使DNA解鏈，然后使引物結合到互補DNA鏈上
（2）Xba I和Sac I；防止目的基因（S基因）自身環(huán)化、防止目的基因（S基因）反向連接
（3）從受體細胞中提取mRNA，用標記的S基因作探針，與mRNA雜交；顯示出雜交帶
（4）抗體和記憶（B）細胞
【解析】解：（1）利用PCR技術擴增S基因前，需根據S基因的核苷酸序列設計2（兩）種引物；進行PCR時需加熱至90～95℃然后冷卻至55～60℃，此操作的目的是使DNA解鏈，然后使引物結合到互補DNA鏈上．（2）農桿菌中的Ti質粒上的T﹣DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T﹣DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．圖中Ti質粒的T﹣DNA上有限制酶Xba I和Sac I的識別位點，因此將S基因插入Ti質粒中構建基因表達載體時，需要在S基因前后兩端分別引入Xba I和Sac I 的酶切位點，用兩種限制酶切割還能防止目的基因（S基因）自身環(huán)化、防止目的基因（S基因）反向連接．（3）用分子雜交技術檢測S基因是否轉錄出mRNA的具體操作過程是從受體細胞中提取mRNA，用標記的S基因作探針，與mRNA雜交，若顯示出雜交帶，則表明轉錄出了mRNA．（4）乙肝疫苗的接種需要在一定時期內間隔注射3次，其目的是使機體產生更多的抗體和記憶（B）細胞．
【考點精析】解答此題的關鍵在于理解基因工程的原理及技術的相關知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．