Question

【題目】淀粉酶是工業(yè)生產(chǎn)上用途最廣、產(chǎn)量最大的酶制劑產(chǎn)品之一。為了提高淀粉酶的生產(chǎn)水平，首先要從土壤中篩選出產(chǎn)淀粉酶的活性菌株。某研究人員對(duì)所取土樣進(jìn)行產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌的分離操作(A 組)和計(jì)數(shù)操作(B 組)，過(guò)程如圖Ⅰ。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）步驟①取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要__________(填操作)，步驟④ 所用培養(yǎng)基的碳源是__________；步驟⑤所用固體培養(yǎng)基的制備步驟是計(jì)算→_________→溶化→ 滅菌→倒平板；步驟⑤⑧接種時(shí)需設(shè)置未接種培養(yǎng)基做對(duì)照，目的是_________。

（2）步驟⑦中，將 1mL 菌液分別稀釋 10 倍和 100 倍，每種稀釋度經(jīng)過(guò)步驟⑧各在 3 個(gè)平板上接種(每個(gè)平板的接種量為 0.1mL)，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，2 組平板上的菌落數(shù)分別為59、57、58 和 2、7、5。據(jù)此可得出每升菌液中的活菌數(shù)為_________個(gè)。

（3）圖Ⅱ所用的接種方法_________(填“能”或“不能”)對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)；甲、乙、丙為劃線的三個(gè)區(qū)域，為正確完成整個(gè)接種過(guò)程，接種環(huán)至少進(jìn)行________次灼燒滅菌。

Answer 1

【答案】滅菌 淀粉 稱量 檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染 5.8×106 不能 4

【解析】

1、培養(yǎng)基的制備流程：計(jì)算→稱量→溶解→調(diào)pH值→融化瓊脂→濾裝→包扎標(biāo)記→滅菌→擺斜面或倒平板

2、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌入侵，因此步驟①取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要嚴(yán)格滅菌處理，根據(jù)題意可知，該操作過(guò)程是從土壤中篩選出產(chǎn)淀粉酶的活性菌株，因此步驟④所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，故所用的碳源是以淀粉為唯一碳源；根據(jù)培養(yǎng)基的配制流程：計(jì)算→稱量→溶解→調(diào)pH值→融化瓊脂→濾裝→包扎標(biāo)記→滅菌→擺斜面或倒平板；步驟⑤⑧接種時(shí)需設(shè)置未接種培養(yǎng)基做對(duì)照，目的檢測(cè)檢測(cè)配制的培養(yǎng)基是否合格，即是否有雜菌污染。

（2）稀釋涂布平板法中，一般選用30―300個(gè)菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，因此采用稀釋10倍和100倍的菌落數(shù)分別為59、57、58 和 2、7、5的進(jìn)行計(jì)算，據(jù)此可得出每升土壤溶液中的活菌數(shù)為：（59+57+58）÷3×10×（0.1×10-3）=5.8×106個(gè)。

（3）識(shí)圖分析可知，圖Ⅱ所用的接種方法為平板劃線法，用該方法可以將微生物分離獲得單個(gè)菌落，但是不能對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)；圖中甲、乙、丙為劃線的三個(gè)區(qū)域，說(shuō)明進(jìn)行了三次劃線操作，接種過(guò)程中接種環(huán)首先要進(jìn)行灼燒滅菌，冷卻后沾取菌種進(jìn)行第一次劃線，然后在灼燒接種環(huán)，冷卻后在第一次劃線的末端開始第二次劃線，以此類推，因此為正確完成整個(gè)接種過(guò)程，接種環(huán)至少進(jìn)行4次灼燒滅菌。