Question

【題目】他莫昔芬（Tamoxifen）是治療乳腺癌的常用藥物，然而長(zhǎng)期服用容易引起耐藥性。牛樟芝（AC）是一種傳統(tǒng)的藥用蘑菇提取物，科研人員用AC處理Tamoxifen抗性的乳腺癌細(xì)胞（MCF-7tamR），發(fā)現(xiàn)其可以緩解Tamoxifen的耐藥性，相關(guān)研究如下，請(qǐng)回答問(wèn)題：

（1）乳腺癌發(fā)生的根本原因是外界致癌因子引起了________突變。

（2）科研人員在不同條件下培養(yǎng)MCF-7tamR細(xì)胞，分別于24h、48h測(cè)定細(xì)胞增長(zhǎng)率，結(jié)果如圖1所示。

①體外培養(yǎng)MCF-7tamR細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基中除水、糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、促生長(zhǎng)因子外，通常還需要加入______和抗生素；傳代培養(yǎng)時(shí)，貼滿瓶壁的細(xì)胞需要用_____等處理后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

②分析圖1結(jié)果，依據(jù)__________，可知AC和Tamoxifen聯(lián)合使用對(duì)于MCF-7tamR細(xì)胞的治療效果最好。

（3）Skp2和RhoA是乳腺癌細(xì)胞中兩種關(guān)鍵酶，前者抑制細(xì)胞凋亡，后者影響細(xì)胞代謝。兩種酶是基因通過(guò)___________過(guò)程指導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)。

（4）為進(jìn)一步探明AC的作用機(jī)理，研究人員從100μg/ml AC處理24h的MCF-7tamR細(xì)胞中獲取mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA后，特異性擴(kuò)增skp2和RhoA基因的片段，進(jìn)行電泳檢測(cè)。結(jié)果如圖2所示。

①β-actin基因在不同細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄水平相對(duì)穩(wěn)定，且表達(dá)量較高，在實(shí)驗(yàn)中可消除______等無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，常用作參照基因。

②由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，AC抑制了細(xì)胞中Skp2、RhoA基因的_______過(guò)程。據(jù)此推測(cè)AC的作用機(jī)制可能是__________。

Answer 1

【答案】原癌基因和抑癌基因 血清 胰蛋白酶 聯(lián)合使用AC和Tamoxifen時(shí)的細(xì)胞增長(zhǎng)率，比單獨(dú)使用AC和Tamoxifen時(shí)低 轉(zhuǎn)錄和翻譯 檢測(cè)方法 轉(zhuǎn)錄 抑制Skp2、RhoA基因表達(dá)，促進(jìn)MCF-7 tamR細(xì)胞凋亡，影響細(xì)胞代謝

【解析】

根據(jù)題意，AC可緩解Tamoxifen的耐藥性，根據(jù)表格中數(shù)據(jù)，比較Tamoxifen組、AC100μg/ml組、AC100μg/ml+Tamoxifen組對(duì)細(xì)胞增長(zhǎng)率的影響，24h和48h的細(xì)胞增長(zhǎng)率為：Tamoxifen組﹥AC100μg/ml組﹥AC100μg/ml+Tamoxifen組；比較Tamoxifen組、AC150μg/ml組、AC150μg/ml+Tamoxifen組對(duì)細(xì)胞增長(zhǎng)率的影響，24h細(xì)胞增長(zhǎng)率為：Tamoxifen組﹥AC150μg/ml組≈AC150μg/ml+Tamoxifen組；48h細(xì)胞增長(zhǎng)率為：Tamoxifen組﹥AC150μg/ml組﹥AC150μg/ml+Tamoxifen組；且48h細(xì)胞增長(zhǎng)率AC100μg/ml+Tamoxifen組﹥AC150μg/ml+Tamoxifen組，說(shuō)明施加AC確可緩解Tamoxifen的耐藥性且該效應(yīng)與濃度有關(guān)，據(jù)此分析。

（1）乳腺癌發(fā)生的根本原因是外界致癌因子引起了原癌基因和抑癌基因突變。

（2）①體外培養(yǎng)MCF-7tamR細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基中除水、糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、促生長(zhǎng)因子外，通常還需要加入血清和抗生素；傳代培養(yǎng)時(shí)，貼滿瓶壁的細(xì)胞需要用胰蛋白酶等處理后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

②分析圖1結(jié)果，聯(lián)合使用AC和Tamoxifen時(shí)的細(xì)胞增長(zhǎng)率，比單獨(dú)使用AC和Tamoxifen時(shí)低，說(shuō)明AC和Tamoxifen聯(lián)合使用對(duì)于MCF-7tamR細(xì)胞的治療效果最好。

（3）Skp2和RhoA是乳腺癌細(xì)胞中兩種關(guān)鍵酶，前者抑制細(xì)胞凋亡，后者影響細(xì)胞代謝。兩種酶是基因通過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程指導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)。

（4）①β-actin基因在不同組細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄水平相對(duì)穩(wěn)定，且表達(dá)量較高，在實(shí)驗(yàn)中可消除檢測(cè)方法等無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，常用作參照基因。

②由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，AC組細(xì)胞擴(kuò)增出的Skp2、RhoA基因片段幾乎沒(méi)有，說(shuō)明未獲取得到相關(guān)mRNA，推測(cè)AC抑制了細(xì)胞中Skp2、RhoA基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。據(jù)此推測(cè)AC的作用機(jī)制可能是抑制Skp2、RhoA基因表達(dá)，從而促進(jìn)MCF-7 tamR細(xì)胞凋亡，從而影響細(xì)胞代謝。