Question

ch1L基因是藍(lán)藻擬核DNA上與葉綠素合成有關(guān)的基因。為研究該基因?qū)θ~綠素合成的控制，需要構(gòu)建該種生物缺失ch1L基因的變異株細(xì)胞。構(gòu)建過程如下：
第①步：用PCR技術(shù)從藍(lán)藻環(huán)狀DNA中擴(kuò)增出ch1L基因片段。
第②步：將ch1L基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成重組質(zhì)粒1。
第③步：將重組質(zhì)粒1中ch1L基因中部0.8kb片段刪除，用一段紅霉素抗性基因取代之，得到重組質(zhì)粒2。
第④步：將重組質(zhì)粒2導(dǎo)入藍(lán)藻細(xì)胞，由于改造后的基因與ch1L基因仍有很長(zhǎng)的序列相同，所以能準(zhǔn)確地與其發(fā)生同源重組，產(chǎn)生出缺失ch1L基因的突變株。

請(qǐng)根據(jù)上述資料，回答下列問題：
(1)第①步用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA片段時(shí)用到的耐高溫的酶通常是指什么酶？________。PCR擴(kuò)增DNA時(shí)必須加入引物，其作用是_____________。
(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA一般要經(jīng)過三十多次循環(huán)，每次循環(huán)都要經(jīng)過三個(gè)步驟，其中“復(fù)性”這一步驟發(fā)生的變化是________________。
(3)構(gòu)建重組質(zhì)粒1、2時(shí)，為保證成功率，往往使用_________酶對(duì)基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割，以切出相同的黏性末端，便于連接。此酶的作用是將DNA分子的___________鍵打開。
(4)質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體，其化學(xué)本質(zhì)是________，此外還可用噬菌體、動(dòng)植物病毒作用為運(yùn)載體。
(5)導(dǎo)入重組質(zhì)粒2以后，往往還需要進(jìn)行檢測(cè)和篩選，可用________制成探針，檢測(cè)是否導(dǎo)入了重組基因，在培養(yǎng)基中加入_______________可將變異株細(xì)胞篩選出來。

Answer 1

(1)TaqDNA聚合酶    與模板結(jié)合，使DNA聚合酶從引物3′端延伸DNA鏈
(2)引物通過堿基互補(bǔ)與DNA模板鏈結(jié)合
(3)同一種DNA限制性內(nèi)切酶    磷酸二酯鍵
(4)小型環(huán)狀DNA
(5)紅霉素抗性基因     紅霉素