Question

【題目】我國(guó)肝損傷病的發(fā)生率較高，據(jù)研究，不同濃度的胰島素對(duì)減緩肝

細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且胰島素濃度越高保護(hù)作用越強(qiáng)：LPS是一種導(dǎo)致肝損傷的常見物質(zhì)（用生理鹽水配制）。現(xiàn)欲以大鼠為材料驗(yàn)證上述結(jié)論，回答下列問題：

（1）材料制備：

①肝細(xì)胞懸液的制備：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用______酶消化，經(jīng)多次洗滌離心處理得到分散的肝細(xì)胞，加入適宜的細(xì)胞培養(yǎng)液置于卡氏瓶和CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行______培養(yǎng)，將培養(yǎng)得到的肝細(xì)胞懸液隨機(jī)分為5組，編號(hào)為A-E，每組均需再______，置于相同且適宜的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)備用。

②胰島素溶液：用生理鹽水配制低、中、高三種濃度的胰島素溶液，分別加入到C、D、E組的肝細(xì)胞懸液中。

（2）實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果預(yù)期：

①A組作為空白對(duì)照組，則往B、C、D、E組還需加入等量的______。

②若本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果用細(xì)胞存活率作為檢測(cè)指標(biāo)，各組的存活細(xì)胞數(shù)先用______測(cè)出OD值，然后計(jì)算各組的細(xì)胞存活率=該組OD值/A組OD值*100%，不考慮細(xì)胞死亡對(duì)OD值的影響。

③用柱形圖表示各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。______

（3）實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平分析推測(cè)胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷的機(jī)理可能有______（至少寫出二點(diǎn)）。

Answer 1

【答案】胰蛋白 原代 設(shè)置多個(gè)重復(fù)樣液 LPS 比色計(jì) 延緩細(xì)胞分裂、延緩細(xì)胞凋亡

【解析】

根據(jù)題意，該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑轵?yàn)證不同濃度的胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且胰島素濃度越高保護(hù)作用越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)自變量為不同濃度的胰島素，因變量為細(xì)胞損傷程度，可以用細(xì)胞的存活率來(lái)表示；為了使實(shí)驗(yàn)更具有科學(xué)性，需要設(shè)置空白對(duì)照組和經(jīng)作用后的對(duì)照組。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、�?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則和實(shí)驗(yàn)的部分步驟，依據(jù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程，可進(jìn)行如下操作：

（1）材料制備：

①肝細(xì)胞懸液的制備：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用胰蛋白酶消化，經(jīng)多次洗滌離心處理得到分散的肝細(xì)胞，加入適宜的細(xì)胞培養(yǎng)液置于卡氏瓶和CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)，將培養(yǎng)得到的肝細(xì)胞懸液隨機(jī)分為5組，編號(hào)為A-E，每組均需再設(shè)置多個(gè)重復(fù)樣液，置于相同且適宜的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)備用。

②胰島素溶液：用生理鹽水配制低、中、高三種濃度的胰島素溶液，分別加入到C、D、E組的肝細(xì)胞懸液中。

（2）實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果預(yù)期：

①A組作為空白對(duì)照組，則往B、C、D、E組還需加入等量的LPS。

②若本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果用細(xì)胞存活率作為檢測(cè)指標(biāo)，各組的存活細(xì)胞數(shù)先用比色計(jì)測(cè)出OD值，然后計(jì)算各組的細(xì)胞存活率=該組OD值/A組OD值*100%，不考慮細(xì)胞死亡對(duì)OD值的影響。

③實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為：胰島素濃度越高，細(xì)胞存活率越大，故用柱形圖表示各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

（3）實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平分析推測(cè)胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷的機(jī)理可能有延緩細(xì)胞分裂、延緩細(xì)胞凋亡等。