Question

【題目】微生物培養(yǎng)技術(shù)在醫(yī)療、工業(yè)生產(chǎn)、食品生產(chǎn)等方面均有應用。下表是一種培養(yǎng)基的配方，請回答：

牛肉膏	蛋白胨	NaCl	瓊脂	水
0．5g	1g	0．5g	2g	200ml

（1）此培養(yǎng)基中的蛋白胨主要為微生物提供 。在各種成分溶化后分裝前，必須進行的是 和滅菌。

（2）臨床使用抗生素前，有時需要進行細菌的耐藥性試驗，其大致過程是：將含有某種細菌的菌液用 法接種在培養(yǎng)基表面并進行培養(yǎng)，最終形成單個的菌落；再分別將含有等劑量不同種抗生素的相同大小的圓形濾紙片置于該平板上有菌落的位置，繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，若濾紙片下的菌落死亡，說明該細菌對該抗生素 。（填“敏感”或“不敏感”）

（3）用上述方法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，一般選擇菌落在 的平板進行計數(shù)，在某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0．2ml，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的菌落數(shù)為 。在進行分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。A同學的實驗結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有__________________（填序號）。

①由于土樣不同 ②由于培養(yǎng)基污染 ③由于操作失誤 ④沒有設置對照

（4）在篩選纖維素分解菌的過程中，通常用__________________法，這種方法能夠通過顏色反應直接對纖維素分解菌進行篩選。甲同學在實驗時得到了如下圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于 。

A．③ B．①② C．②③ D．①②③

Answer 1

【答案】（1）碳源、氮源和生長因子 調(diào)節(jié)pH

（2）稀釋涂布平板 敏感

（3）30-300 2．5×107 ①②③

（4）剛果紅染色 A

【解析】

試題分析： ⑴此培養(yǎng)基中的蛋白胨主要為微生物提供碳源、氮源和生長因子。在各種成分溶化后分裝前，應該先調(diào)節(jié)pH，然后滅菌，以防止雜菌污染培養(yǎng)基。

⑵分離純化菌種，可采用稀釋涂布平板法將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)；在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。將含有等劑量不同種抗生素的相同大小的圓形濾紙片置于該平板上有菌落的位置，繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，若濾紙片下的菌落死亡，說明該細菌對該抗生素敏感。

⑶用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，為保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進行計數(shù)，在某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0．2ml，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的菌落數(shù)＝（50÷0．2）×105＝2．5×107。A同學與其他同學篩選的菌落數(shù)差異很大，可能的原因是：采集的土樣不同、培養(yǎng)基滅菌不徹底而導致培養(yǎng)基被污染、或是實驗過程中沒有進行無菌操作，造成操作失誤，即①②③。

⑷剛果紅可與纖維素形成紅色復合物，但并不和纖維素水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生顏色反應。當纖維素被纖維素酶水解后，剛果紅—纖維素復合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。據(jù)此可知：篩選纖維素分解菌，常用剛果紅染色法，圖示中的纖維素分解菌位于③，A項正確，B、C、D三項均錯誤。