Question

【題目】請(qǐng)回答下列問(wèn)題

（1）為了從土壤中篩選能有效降解有害有機(jī)化合物A的細(xì)菌，研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌），從功能看該培養(yǎng)基為____________培養(yǎng)基，在對(duì)該菌進(jìn)行分離、純化、計(jì)數(shù)過(guò)程中，常采用________法接種。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需配制空白培養(yǎng)基作為對(duì)照，如果空白培養(yǎng)基中無(wú)菌落形成而實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中形成的菌落如圖所示，造成這種結(jié)果的原因可能是______ 。

（2）用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，最好選擇群落在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為30個(gè)，所用稀釋液的體積為0.2mL，則每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)為________________________。菌落是指________________________

（3）某植物富含果膠、淀粉、蛋白質(zhì)和纖維素成分。在用該材料提取過(guò)果膠和淀粉后的剩渣加工飲料工藝研究中，將剩渣制成的汁液經(jīng)蛋白酶和纖維素酶徹底酶解處理后，發(fā)現(xiàn)仍存在渾濁和沉淀問(wèn)題，你將如何解決這一問(wèn)題?______________。在果汁生產(chǎn)中，為了提高果膠酶的使用效率和產(chǎn)品純度，一般需要將酶用______________法進(jìn)行固定化處理。

（4）用凝膠色譜法提取分離血紅蛋白時(shí)，用_______________洗滌紅細(xì)胞，用_________破裂紅細(xì)胞使血紅蛋白得以釋放，如果裝填的凝膠色譜柱中出現(xiàn)氣泡，氣泡會(huì)_________，降低分離效果。

Answer 1

【答案】選擇 稀釋涂布平板 土壤中含有4種能降解有機(jī)物A的細(xì)菌或培養(yǎng)基不純含有其他碳源和氮源或接種過(guò)程被雜菌感染 1.5107 由單固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成以母細(xì)胞為中心的個(gè)微生物細(xì)胞在適宜肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)、構(gòu)造等特征的子細(xì)胞集團(tuán) 在渾濁和有沉淀的汁液中加入果膠酶和淀粉酶 化學(xué)結(jié)合法或物理吸附法 生理鹽水 蒸餾水和甲苯 攪亂蛋白質(zhì)的洗脫次序

【解析】

1、實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選的原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等) ,同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

2、微生物常見(jiàn)的接種的方法

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在保溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

3、凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快。

(1)只有能利用化合物A微生物才能在該培養(yǎng)基上生存，因此該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，其能成功地篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)；接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，因此在分離、純化、計(jì)數(shù)過(guò)程中，常采用稀釋涂布法接種；如果空白培養(yǎng)基中無(wú)菌落形成而實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中形成的菌落如圖所示，造成這種結(jié)果的原因可能是土壤中含有4種能降解有機(jī)化合物A的細(xì)菌或培養(yǎng)基不純，含有其他碳源和氮源或接種過(guò)程中被雜菌污染。

(2)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，最好選擇群落在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為30個(gè)，所用稀釋液的體積為0.2mL，則每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)為30÷0.2×105= 1.5107個(gè)。菌落是指由單固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成以母細(xì)胞為中心的個(gè)微生物細(xì)胞在適宜肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)、構(gòu)造等特征的子細(xì)胞集團(tuán)。

(3)某植物富含果膠、淀粉、蛋白質(zhì)和纖維素成分。在用該材料提取過(guò)果膠和淀粉后的剩渣加工飲料工藝研究中，將剩渣制成的汁液經(jīng)蛋白酶和纖維素酶徹底酶解處理后，發(fā)現(xiàn)仍存在渾濁和沉淀問(wèn)題，這是由果膠和淀粉造成的，則可在渾濁和有沉淀的汁液中加入果膠酶和淀粉酶，固定化方法包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法，由于酶分子比較小，容易從包埋材料中漏出，因此固定化酶一般采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。

（4）用凝膠色譜法提取分離血紅蛋白時(shí)，用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞，用蒸餾水和甲苯破裂紅細(xì)抱胞使血紅蛋白得以釋放，如果裝填的疑膠色譜柱中出現(xiàn)氣泡，氣泡會(huì)攪亂洗脫次序，降低分離效果。