Question

【題目】錦鯉皰疹病毒是一種雙鏈DNA病毒。下圖為TaqMan熒光探針技術(shù)的原理示意圖，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)該探針被Taq酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增1個(gè)DNA分子，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在基因工程中，目前獲取目的基因的常用方法除了利用PCR技術(shù)擴(kuò)增外，還有___________和_________兩種類型。

（2）引物的化學(xué)本質(zhì)是_________，其與模板DNA的結(jié)合具有_________性。

（3）通常情況下，探針中的GC含量比引物中的略高，這有利于保證退火時(shí)_________與模板DNA結(jié)合。

（4）用TaqMan熒光探針技術(shù)檢測(cè)錦鯉皰疹病毒時(shí)，在反應(yīng)體系中要加相應(yīng)的病毒遺傳物質(zhì)、引物、探針和_________、_________酶等，其中酶發(fā)揮的具體作用是延伸DNA鏈和_________。

（5）若最初該反應(yīng)體系中只有一個(gè)病毒DNA分子，經(jīng)n次循環(huán)后，需要消耗TaqMan熒光探針_________個(gè)。

Answer 1

【答案】從基因文庫(kù)中獲取 人工合成 DNA單鏈 特異 探針先于引物 4種脫氧核苷酸（或Mg2+） Taq 將探針?biāo)��?/span> 2n-1

【解析】

PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制

（2）過(guò)程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。

（1）在基因工程中，目前獲取目的基因的常用方法有：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增、從基因文庫(kù)中獲取、人工合成。

（2）引物的化學(xué)本質(zhì)是DNA單鏈，其與模板DNA的結(jié)合具有特異性。

（3）通常情況下，探針中的GC含量比引物中的略高，這有利于保證退火時(shí)探針先于引物與模板DNA結(jié)合。

（4）PCR擴(kuò)增所需的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），結(jié)合圖中信息可知，用TaqMan熒光探針技術(shù)檢測(cè)錦鯉皰疹病毒時(shí)，在反應(yīng)體系中要加相應(yīng)的病毒遺傳物質(zhì)、引物、探針和4種脫氧核苷酸、Taq酶等；由圖可知，酶發(fā)揮的具體作用是延伸DNA鏈和將探針?biāo)�解�?/span>

（5）根據(jù)題干信息可知，“熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步”，因此計(jì)算時(shí)需要去除原來(lái)親代的DNA分子，因此若最初該反應(yīng)體系中只有一個(gè)病毒DNA分子，經(jīng)n次循環(huán)后，需要消耗TaqMan熒光探針2n-1個(gè)。