Question

【題目】某地土壤中有一種有害的、難以降解的有機(jī)化合物A，研究人員從該地土壤中篩選獲得了一種只能降解、利用化合物A的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有_____________、_____________和高壓蒸汽滅菌。

（2）②中用于培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入化合物A作為唯一__________。

（3）測(cè)定②中活細(xì)菌的數(shù)量，常采用__________法。在某一次實(shí)驗(yàn)中，平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)／平板，與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌菌落數(shù)較__________。在6個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0．1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178、175和191，則每毫升土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為__________。

（4）④作為對(duì)照，該細(xì)菌在④中不生長(zhǎng)，在⑤中生長(zhǎng)，④與⑤的培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_____。

Answer 1

【答案】灼燒滅菌 干熱滅菌 碳源 稀釋涂布平板 少 1.7 5×108 ④的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入化合物A作為碳源，而⑤的培養(yǎng)基中加入了化合物A作為碳源

【解析】

本題考查微生物培養(yǎng)和篩選方法。微生物的培養(yǎng)需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。常用滅菌方法如下：

1、灼燒滅菌，將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他的金屬用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層燃燒，可以迅速的徹底地滅菌。

2、干熱滅菌，將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)在160-170度加熱1-2小時(shí)可以達(dá)到滅菌的目的。

3、高壓蒸汽滅菌將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌的方法。

4、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。兩種方法都可以獲得單菌落，但后者還可以進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

（1）實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌它們分別適用于不同的實(shí)驗(yàn)器材。

（2）因?yàn)橐�篩選只能降解、利用化合物A的細(xì)菌，所以要求選擇培養(yǎng)基中只加入化合物A作為唯一碳源。

（3）結(jié)合題干實(shí)驗(yàn)過(guò)程可知，活菌計(jì)數(shù)法通常采取了稀釋涂布平板法。該方法與血球計(jì)數(shù)法相比結(jié)果偏小，因?yàn)楹笳甙阉赖木�體也即入其中。在6個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上接種并培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)只有156、178、175和191四個(gè)平板符合計(jì)數(shù)要求，所以每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量=（156+178+191+175）÷4÷0.1×105=1.75×108個(gè)。

（4）④作為對(duì)照，該細(xì)菌在④中不生長(zhǎng)，在⑤中生長(zhǎng)，④與⑤的培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入化合物A作為碳源，而⑤的培養(yǎng)基中加入了化合物A作為碳源。用這種方法可以檢驗(yàn)獲得的菌種是否符合要求。