Question

【題目】下圖為利用人成纖維細胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進行人類基因定位的操作示意圖，請回答相關(guān)問題。

（1）圖示方法是____________________技術(shù)的應(yīng)用，該技術(shù)的基礎(chǔ)是_____________________技術(shù)。

（2）操作所用的成纖維細胞應(yīng)傳代_____代以內(nèi)，誘導(dǎo)融合時需要加入的促融劑是________________。

（3）人、鼠細胞先經(jīng)過細胞膜融合形成多核細胞，再經(jīng)過一次____________，形成單核細胞。

（4）HAT培養(yǎng)基起__________培養(yǎng)作用，操作中加入鳥本苷的目的是________________________。細胞培養(yǎng)所需的氣體條件是95%空氣和5%CO2，其中CO2的主要目的是______________；除以上兩類條件外，動物細胞體外培養(yǎng)還需要___________和_______兩項條件。

（5）表所示為雜交細胞A、B、C中存在的人類染色體及人類特有的4 種酶（“+”表示存在，“-”表示不存在），這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生，據(jù)表判斷，編碼________酶的基因位于染色體2上，排列方式呈____________。

Answer 1

【答案】 動物細胞融合 動物細胞培養(yǎng) 10 PEG（或滅活病毒） 有絲分裂 選擇 除去成纖維細胞 維持培養(yǎng)液的pH 營養(yǎng) 無菌無毒的環(huán)境 m和p 線性

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，成纖維細胞和小鼠骨髓瘤細胞在促融劑的作用下形成三種雜交細胞，即成纖維細胞自身融合細胞、小鼠骨髓瘤細胞自身融合的細胞和雜交細胞；在HAT培養(yǎng)基上篩選出成纖維細胞自身融合細胞和雜交細胞；加人鳥本苷的目的是除去成纖維細胞，留下雜交細胞。雜交細胞A中存在2和3號染色體，表達出酶m和p；雜交細胞B存在1和3號染色體，表達出酶n和q；雜交細胞C中存在1和2號染色體，表達出酶m、n、p和q，說明編碼m和p酶的基因位于染色體2上，編碼n和q酶的基因位于染色體1上。

（1）據(jù)圖分析，該技術(shù)屬于動物細胞融合技術(shù)，基礎(chǔ)是動物細胞培養(yǎng)。

（2）目前使用的正常細胞通常為10代以內(nèi)的，可以保持細胞正常的二倍體核型。成纖維細胞應(yīng)傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變的細胞株，誘導(dǎo)融合時需要加入的促融劑是PEG（或滅活病毒）。

（3）人、鼠細胞先經(jīng)過細胞膜融合形成多核細胞，經(jīng)過一次有絲分裂，形成單核細胞。

（4）據(jù)題干信息，人成纖維細胞能在HAT培養(yǎng)基上存活，而小鼠骨髓瘤細胞不能在HAT培養(yǎng)基上存活，則HAT培養(yǎng)基起選擇培養(yǎng)作用，篩選出人成纖維細胞和成纖維細胞融合的雜交細胞，操作中加人鳥本苷的目的是除去成纖維細胞，篩選出雜交細胞；動物細胞培養(yǎng)所需的氣體條件是95%空氣和5%CO2，其中CO2的主要目的是維持培養(yǎng)液的pH；除以上兩類條件外，動物細胞體外培養(yǎng)還需要充足的營養(yǎng)和無菌無毒的環(huán)境條件。

（5）據(jù)表判斷，雜交細胞B中不存在2號染色體，酶m和p沒有表達，說明編碼m和p酶的基因位于染色體2上，排列方式呈線性。