Question

【題目】如圖是制備抗埃博拉病毒(EBOV)VP40蛋白單克隆抗體的過程，請據(jù)圖回答問題：

(1)通過PCR技術(shù)獲取目的基因的過程中，反應(yīng)體系中除了加入含有EBOV VP40基因的DNA、dNTP，還應(yīng)該有___________酶和根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計的_____________。

(2)選用EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是____________________________。

(3)大腸桿菌獲得重組質(zhì)粒A，從而發(fā)生穩(wěn)定遺傳變化的過程可稱為________。該過程首先需要用________處理大腸桿菌，使其更易吸收環(huán)境中的DNA分子。

(4)過程⑥常用的不同于誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的方法是用___________處理，該過程能產(chǎn)生的兩兩融合的細(xì)胞有_______種。若把在HAT選擇培養(yǎng)基上存活的細(xì)胞全部培養(yǎng)在同一培養(yǎng)基中，從中提取出的抗體_________(填“是”或“不是”)單克隆抗體。

(5)體內(nèi)培養(yǎng)是指把能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，一段時間后，從__________中提取單克隆抗體。圖示過程應(yīng)用了哪些生物技術(shù)：__________________________。

Answer 1

【答案】Taq(熱穩(wěn)定的DNA聚合) 引物 防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率(其他合理答案也可) 轉(zhuǎn)化 Ca2+ 滅活的病毒 3 不是 腹水 基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合

【解析】

1、圖示過程中，①為獲取目的基因，②為形成重組質(zhì)粒，③為目的基因的導(dǎo)入，④為獲取相應(yīng)的蛋白質(zhì)，⑤為注射入B淋巴細(xì)胞，⑥為形成雜交瘤細(xì)胞，⑦為獲取單克隆抗體。

2、PCR技術(shù)的過程：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸，條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)。

3、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增③人工合成 (化學(xué)合成)。原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成。

4、DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶) 、DNA連接酶、運(yùn)載體.

5、動物細(xì)胞融合原理是：細(xì)胞增殖、細(xì)胞膜的流動性；細(xì)胞融合的方法有：物理法：離心、振動、電激；化學(xué)法：聚乙二醇；生物法：滅活的病毒(滅活的仙臺病毒) 。最廣泛的應(yīng)用是：制備單克隆抗體，一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。

(1)PCR擴(kuò)增目的基因需要熱穩(wěn)定的DNA聚合酶和引物。

(2)EcoRⅠ和XhoⅠ切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向連接或自身環(huán)化，酶切時可同時選用EcoRⅠ和XhoⅠ，提高連接成功率。

(3)大腸桿菌獲得重組質(zhì)粒，從而發(fā)生穩(wěn)定遺傳變化的過程可稱為轉(zhuǎn)化，將目的基因?qū)�入�?xì)菌的過程中首先需要用Ca2+處理大腸桿菌，使其更易吸收環(huán)境中的DNA分子。

(4)不同于誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法是用滅活的病毒處理。兩種細(xì)胞(分別用A細(xì)胞、B細(xì)胞表示)兩兩融合得到A—A、A—B、B—B三種融合細(xì)胞，選擇培養(yǎng)基上的雜交瘤細(xì)胞可產(chǎn)生多種抗體，因此產(chǎn)生的抗體不是單克隆抗體。

(5)將能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，一段時間后，可從腹水中提取單克隆抗體。題圖示過程應(yīng)用了基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合等生物技術(shù)。