Question

【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注．請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序列及切割位點

（1）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過酶作用后獲得重組質粒．為了擴增重組質粒，需將其轉入處于態(tài)的大腸桿菌．
（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中 ．
（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 ， 對于該部位，這兩種酶（填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開．
（4）若用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得種大小不同的DNA片段．

Answer 1

【答案】
（1）BclI和HindⅢ；連接；感受
（2）四環(huán)素；引物甲和引物丙
（3）；都不能
（4）7
【解析】解：（1）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ可能使質粒中的啟動子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．酶切后的載體和目的基因片段，通過連接酶作用后獲得重組質粒．為了擴增重組質粒，需將其轉入處于感受態(tài)的大腸桿菌．（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，根據質粒上的抗性基因，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙．（3）根據BamHⅠ和BclI的酶切位點，若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接，則連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，由于與兩種酶的酶切位點均不同，故這兩種酶都不能切開．（4）根據BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位點，Sau3A I在質粒上有三個酶切位點，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段． 故答案為：（1）BclI和HindⅢ連接 感受 （2）四環(huán)素 引物甲和引物丙（3） 都不能 （4）7
基因工程技術的基本步驟：1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA﹣﹣分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質﹣﹣抗原﹣抗體雜交技術．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節(jié)，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱應用和理解層次的考查．