【題目】下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn),圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn),其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:

限制酶

BamHⅠ

Bcl

Sau3AⅠ

HindⅢ

識(shí)別序

列及切

割位點(diǎn)

(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒,應(yīng)選用________兩種限制酶切割,酶切后的載體和目的基因片段,通過(guò)________酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒,需將其轉(zhuǎn)入處于________態(tài)的大腸桿菌。

(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加________,平板上長(zhǎng)出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中______________

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接,連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為_______,對(duì)于該部位,這兩種酶________(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開(kāi)。

(4)若用Sau3AⅠ切圖1質(zhì)粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。

【答案】1BclIHindⅢ 連接 感受

2)四環(huán)素 引物甲和引物丙

3都不能

47

【解析】1)選擇的限制酶在目的基因的兩側(cè)都應(yīng)該有切割位點(diǎn),又因?yàn)橛?/span>BamHⅠ酶會(huì)將兩個(gè)標(biāo)記基因都破壞,所以構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)只能選擇BclIHindⅢ對(duì)質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割,漏出兩種不同的粘性末端,再利用DNA連接酶將兩者定向連接。再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入感受態(tài)的大腸桿菌進(jìn)行擴(kuò)增。

2)由于構(gòu)建重組質(zhì)粒的時(shí)候,氨芐青霉素抗性基因被破壞,而四環(huán)素的抗性基因沒(méi)有被破壞,所以為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。根據(jù)圖2可知對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)的引物應(yīng)該是引物甲和引物丙。

3)根據(jù)表格中堿基分析,若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接,連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為,對(duì)于該部位,這兩種酶都不能切開(kāi)。

4)根據(jù)表格分析可知Sau3A I可以切割BclIBamHⅠ的切割位點(diǎn),所以若用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。

練習(xí)冊(cè)系列答案
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A. 圖中的a、b、c代表的所有生物,共同組成一個(gè)生物群落

B. 圖中a營(yíng)養(yǎng)級(jí)各種生物之間緊密聯(lián)系,不具有競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系

C. 圖中所示各營(yíng)養(yǎng)級(jí)生物的數(shù)量發(fā)生變化,但物種的豐富度基本未變

D. 圖中b營(yíng)養(yǎng)級(jí)獲得的能量最多,c營(yíng)養(yǎng)級(jí)獲得的能量最少

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(1)通過(guò)基因工程生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠,其核心是__________________,所需工具除了載體、限制性核酸內(nèi)切酶外,還需要________。

A.DNA聚合酶 B.DNA連接酶

C.RNA聚合酶 D.解旋酶

(2)據(jù)圖分析,1的受體2為________細(xì)胞;該轉(zhuǎn)基因小鼠的性別取決于______(填“甲”或“乙”)。若要檢測(cè)該轉(zhuǎn)基因小鼠中目的基因是否成功表達(dá),則可以從小鼠的________中提取生長(zhǎng)激素,進(jìn)行特異性檢測(cè)。

(3)該實(shí)驗(yàn)涉及胚胎移植、______________等胚胎工程技術(shù)。胚胎移植前,需要對(duì)丙的處理是________________________________________________________________________。

若要獲得多只和丙具有相同遺傳物質(zhì)的小鼠,可以對(duì)早期胚胎進(jìn)行__________處理。

A.胚胎干細(xì)胞核移植 B.胚胎分割 C.胚胎細(xì)胞克隆 D.胚胎細(xì)胞誘變

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A. ①②過(guò)程應(yīng)使用不同的限制性內(nèi)切酶

B. ①②過(guò)程都要使用DNA連接酶

C. 終止密碼子是基因表達(dá)載體的重要組成部分

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(1)衡量本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的指標(biāo)是_______

(2)上述圖中最有效的是____培養(yǎng)皿中的抗生素。

(3)用上述最有效的抗生素對(duì)細(xì)菌進(jìn)行處理,并測(cè)定細(xì)菌數(shù)量變化,如下圖所示。

①向培養(yǎng)基中加抗生素的時(shí)刻為____點(diǎn)。

②細(xì)菌種群的進(jìn)化是定向的,而變異是____,細(xì)菌的抗藥性產(chǎn)生于環(huán)境變化之____(填“前”“中”或“后”),抗生素對(duì)細(xì)菌變異的作用不是“誘導(dǎo)”而是____。

③盡管有抗藥性基因存在,但使用抗生素仍然能治療由細(xì)菌引起的感染,原因在于細(xì)菌種群中__________。

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