Question

【題目】【生物—選修3：現(xiàn)代生物科技專題】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞。科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如下圖：

（1）步驟①中所選的卵母細(xì)胞應(yīng)處于 期。

（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其 分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為 的特點。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的 �？梢愿鶕�(jù)Rag2基因的核苷酸序列設(shè)計合成 ，利用 技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在目的基因所在DNA片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有 酶的酶切位點。

Answer 1

【答案】（1）減數(shù)第二次分裂中（MⅡ中）

（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯

（3）表達(dá)載體（重組質(zhì)粒） 引物 PCR Hind Ⅲ和PstⅠ

【解析】（1）步驟①為核移植，所選的卵母細(xì)胞應(yīng)處于減數(shù)第二次分裂中（MⅡ中）。

（2）重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯。

（3）步驟③中表示將Rag2基因（目的基因）導(dǎo)入ES細(xì)胞（受體細(xì)胞），此過程需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）。設(shè)計引物要遵循堿基互補(bǔ)配對原則，所以根據(jù)Rag2基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計。可利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。Rag2基因片段是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割獲得，所以表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。