Question

【題目】我國科學家目前正在探索培育過量表達蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因（TaSUT1A）的轉(zhuǎn)基因小麥，通過分析TaSUT1A在轉(zhuǎn)基因小麥中的遺傳及其在抗干旱環(huán)境中的作用，選育抗旱的轉(zhuǎn)基因小麥新品種。小麥屬于單子葉植物，下圖為基本技術(shù)流程示意圖。請回答下列問題：

（1）為了大量擴增分離得到的TaSUT1A，一般采用的技術(shù)是______________，該技術(shù)擴增目的基因的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是______________________________。

（2）一般采用相同的_______切割目的基因片段與載體，原因是_________________。

（3）將構(gòu)建好的基因表達載體導入小麥細胞常用____________法，但成本較高；受體細胞經(jīng)脫分化形成愈傷組織，脫分化是讓已經(jīng)分化的細胞經(jīng)誘導后失去其______________________的過程。

（4）為了證明TaSUT1A是否表達，可以通過______________檢測有無蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白生成，并通過與________________中蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白含量的對比來確定TaSUT1A是否過量表達。

Answer 1

【答案】PCR技術(shù) 根據(jù)這一序列合成引物 限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶） 獲得相同的黏性末端 基因槍 特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細胞 抗原-抗體雜交 普通正常小麥

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）為了大量擴增分離得到的TaSUT1A，一般采用的是PCR技術(shù)，該技術(shù)擴增目的基因的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是根據(jù)這一序列合成引物。

（2）一般采用相同的限制酶切割目的基因片段與載體，這樣可獲得相同的黏性末端，便于DNA連接酶連接。

（3）將構(gòu)建好的基因表達載體導入小麥細胞常用基因槍法。愈傷組織在結(jié)構(gòu)形態(tài)上的特點是呈無固定形態(tài)的薄壁細胞。脫分化是讓已經(jīng)分化的細胞經(jīng)誘導后失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細胞的過程。

（4）為了證明TaSUT1A是否表達，可以通過抗原-抗體雜交檢測有無蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白生成，并通過與普通正常小麥中蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白含量的對比來確定TaSUT1A是否過量表達。