Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得轉(zhuǎn)基因油菜品種。

（1）研究人員從陸地棉細(xì)胞中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，如圖為所示限制酶的識(shí)別位點(diǎn)。這樣可以用 （填酶）處理兩個(gè)基因后，可得到____________端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖2所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中。構(gòu)建充足質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含____________的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時(shí)間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，經(jīng)篩選后再將該油菜細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)獲因油菜。整個(gè)過程涉及的原理是 。

Answer 1

【答案】（1）Cla 1（限制酶）和DNA連接酶 A、D

（2）四環(huán)素

（3）基因重組和植物細(xì)胞的全能性

【解析】

試題分析：（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因．在上述引物設(shè)計(jì)時(shí)，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識(shí)別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，得到A、D端相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，該細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，其原理為基因重組和植物細(xì)胞具有全能性。