Question

3．根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：
（1）基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定．
（2）在基因工程的操作過程中需要用到兩種工具酶--限制酶和DNA連接酶．其中限制酶能切割DNA分子，切割后產(chǎn)生黏性末端和平末端；DNA連接酶能將目的基因和載體連接起來，按其來源不同可分為兩類，即T₄DNA連接酶和E．coliDNA連接酶．
（3）質(zhì)粒載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：AATTC…G   G…CTTAA
為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同．
（4）基因工程中常用的載體有質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒和λ噬菌體的衍生物．

Answer 1

分析 基因工程的基本工具：
1、“分子手術(shù)刀”--限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）
（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．
（2）功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．
（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
2、“分子縫合針”--DNA連接酶
（1）兩種DNA連接酶（E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶）的比較：
①相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵．
②區(qū)別：E•coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T₄DNA連接酶來源于T₄噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低．
（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個(gè)DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵．
3、“分子運(yùn)輸車”--載體
（1）載體具備的條件：①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存．②具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入．③具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇．
（2）最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子．
（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．

解答 解：（1）基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定．
（2）限制酶能切割DNA分子，切割后產(chǎn)生黏性末端和平末端；DNA連接酶能將目的基因和載體連接起來，按其來源不同可分為兩類，即T₄DNA連接酶和E．coliDNA連接酶．
（3）兩種不同酶切割之后便于相連，切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的末端相同．
（4）基因工程中常用的載體有質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒和λ噬菌體的衍生物．
故答案為：
（1）目的基因的獲取                基因表達(dá)載體的構(gòu)建
將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞        目的基因的檢測(cè)與鑒定
（2）黏性               平（兩空可調(diào)換位置）
T₄DNA連接酶　   E．coli DNA連接酶（兩空可調(diào)換位置）
（3）切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同（或堿基互補(bǔ)配對(duì)）
（4）動(dòng)植物病毒　　λ噬菌體的衍生物（兩空可調(diào)換位置）

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，重點(diǎn)考查基因工程的工具，只要考生識(shí)記基因工程三種工具的相關(guān)知識(shí)即可，屬于考綱識(shí)記層次的考查，這需要考生在平行的學(xué)習(xí)過程中構(gòu)建相關(guān)知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)．