Question

【題目】下圖是獲得人乳鐵蛋白的技術(shù)路線。（圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三種限制酶的酶切位點(diǎn)如圖所示）

據(jù)圖回答：

（1）已知人乳鐵蛋白基因的全部序列，可通過人工合成法或 技術(shù)獲得人乳鐵蛋白基因。據(jù)圖分析，過程①表示____ ．，該過程需要的限制酶是___ _。篩選含有重組載體的大腸桿菌，培養(yǎng)基中應(yīng)另添加____ 。

（2）圖中過程②最常用的方法是__ __。體外培養(yǎng)受精卵時(shí)，需將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，C02的主要作用是 。

（3）圖中過程___ _（填序號(hào)）表示胚胎移植，在胚胎移植前要對(duì)代孕牛進(jìn)行___ _處理。

（4）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，可采用 技術(shù)。

Answer 1

【答案】

（1）PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）（1分） 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 HindIII和BamH I 氨芐青霉素

（2）顯微注射法 維持培養(yǎng)液的PH

（3）④（1分） 同期發(fā)情（1分）

（4）抗原-抗體雜交

【解析】

（1）已知目的基因的全部序列可以采用化學(xué)方法人工合成，也可以使用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增獲得。圖中過程1是將目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接的基因表達(dá)載體的構(gòu)建，是基因工程的核心。該過程中需要用限制酶對(duì)目的基因和運(yùn)載體進(jìn)行切割，分析圖可知應(yīng)使用HindIII和BamH I才能將目的基因完全切下來然后用DNA連接酶進(jìn)行連接。因?yàn)樵撡|(zhì)粒含有的抗性基因是抗氨芐青霉素的，所以應(yīng)在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行初步篩選。

（2）將目的基因?qū)�入到�?dòng)物受精卵中常使用顯微注射法。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中加入二氧化碳的目的是維持培養(yǎng)液的PH。

（3）將早期胚胎轉(zhuǎn)移到代孕母牛體內(nèi)需要經(jīng)過胚胎移植，即圖中的4過程。代孕母牛的生理狀況要與供體母牛相同，所以要對(duì)它們進(jìn)行同期發(fā)情處理。

（4）檢測目的基因是否表達(dá)成為蛋白質(zhì)需要抗原-抗體雜交，如果出現(xiàn)雜交帶，說明表達(dá)成功。

生物種類	植物	動(dòng)物	微生物
常用方法	農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法	顯微注射技術(shù)	感受態(tài)細(xì)胞法
受體細(xì)胞	體細(xì)胞或受精卵	受精卵	原核細(xì)胞
轉(zhuǎn)化過程	將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的TDNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上→表達(dá)	將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物	Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子