(10分)圓褐固氮菌是自生固氮菌,為經(jīng)濟有效地提高農(nóng)作物產(chǎn)量,人們一直在努力研究、尋找固氮基因。對基因的研究常常因研究樣品中DNA含量太低而難以進行,PCR技術(shù)有效地解決了這個問題。如今對基因的深入研究使人類跨入了蛋白組研究時代,從復雜的細胞混合物中提取、分離高純度的蛋白質(zhì)是該研究要做的基本工作之一。
(1)某同學在做微生物實驗時,不小心把圓褐固氮菌樣品和酵母菌樣品混在一起,已知青霉素會影響固氮菌的生長繁殖,但不影響真菌的生長繁殖。請?zhí)羁胀瓿煞蛛x這兩種菌的主要實驗步驟:
①分別配置 的培養(yǎng)基和 的培養(yǎng)基,分別分成兩份,依次標上A、a、B、b備用;
②分別向A、B培養(yǎng)基接種 ;
③把接種后的培養(yǎng)基放在恒溫箱中3d—4d;
④從A、B培養(yǎng)基上生長的 中挑取生長良好的菌株,分別接種到 中;
⑤ 。
(2)用基因工程技術(shù)從經(jīng)過分離、提純的圓褐固氮菌中獲取固氮基因,然后進行PCR擴增。下列表1和表2分別表示用PCR擴增固氮基因的反應體系及反應條件。
反應條件 | ||
| 溫度 | 時間 |
變 性 | 95℃ | 30s |
復 性 | 55℃ | 30s |
延 伸 | 72℃ | 1min |
30個循環(huán)后 | 適宜 | 5-10min |
保 溫 | 4℃ | 2h |
PCR反應體系 | 50ul |
緩沖液 | 5ul |
脫氧核苷酸 | 1ul |
引物A | 0.5ul |
引物B | 0.5ul |
DNA聚合酶 | 0.5U |
模板DNA | 1-2ul |
加去離子水補足至50 ul |
科目:高中生物 來源: 題型:單選題
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科目:高中生物 來源:2014屆甘肅秦安一中高三第一次檢測生物卷(解析版) 題型:綜合題
(共10分)根據(jù)各類微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)特點和新陳代謝類型,利用選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基,結(jié)合顯微鏡鏡檢以及菌落特征,可以把混雜在一起的大腸桿菌、乳酸菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌、圓褐固氮菌和硝化細菌分離開來。下面是分離篩選的方法步驟,請根據(jù)各個步驟的條件,填寫有關(guān)內(nèi)容。(注:圓褐固氮菌能自生固氮)
⑴用無氮培養(yǎng)基可篩選出___________________。
⑵用不含有機碳源的選擇培養(yǎng)基可篩選出_____________。
⑶酵母菌的篩選需要在常規(guī)培養(yǎng)基中另加入______________。
⑷用加了較高濃度NaCl的選擇培養(yǎng)基可篩選出金黃色葡萄球菌,或者根據(jù)菌落的顏色呈現(xiàn)_________色,將其挑取單獨培養(yǎng) 。
⑸利用伊紅和美藍培養(yǎng)基培養(yǎng)混合菌,菌落呈________色并帶有 的是____________,挑取該菌單獨培養(yǎng),結(jié)合顯微鏡鏡檢和進一步用伊紅和美藍培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)來確定。
⑹在無氧條件下培養(yǎng)混合菌,___________________可以生長,加入一定濃度的乳酸,使培養(yǎng)基pH充分降低,可抑制___________的生長,利用菌落特征,結(jié)合顯微鏡鏡檢,選取生長的菌落,即可分離出____________。
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科目:高中生物 來源:2013屆安徽宿松復興中學高二下學期第三次月考生物試卷(解析版) 題型:綜合題
(10分)圓褐固氮菌是自生固氮菌,為經(jīng)濟有效地提高農(nóng)作物產(chǎn)量,人們一直在努力研究、尋找固氮基因。對基因的研究常常因研究樣品中DNA含量太低而難以進行,PCR技術(shù)有效地解決了這個問題。如今對基因的深入研究使人類跨入了蛋白組研究時代,從復雜的細胞混合物中提取、分離高純度的蛋白質(zhì)是該研究要做的基本工作之一。
(1)某同學在做微生物實驗時,不小心把圓褐固氮菌樣品和酵母菌樣品混在一起,已知青霉素會影響固氮菌的生長繁殖,但不影響真菌的生長繁殖。請?zhí)羁胀瓿煞蛛x這兩種菌的主要實驗步驟:
①分別配置 的培養(yǎng)基和 的培養(yǎng)基,分別分成兩份,依次標上A、a、B、b備用;
②分別向A、B培養(yǎng)基接種 ;
③把接種后的培養(yǎng)基放在恒溫箱中3d—4d;
④從A、B培養(yǎng)基上生長的 中挑取生長良好的菌株,分別接種到 中;
⑤ 。
(2)用基因工程技術(shù)從經(jīng)過分離、提純的圓褐固氮菌中獲取固氮基因,然后進行PCR擴增。下列表1和表2分別表示用PCR擴增固氮基因的反應體系及反應條件。
反應條件 |
||
|
溫度 |
時間 |
變 性 |
95℃ |
30s |
復 性 |
55℃ |
30s |
延 伸 |
72℃ |
1min |
30個循環(huán)后 |
適宜 |
5-10min |
保 溫 |
4℃ |
2h |
PCR反應體系 |
50ul |
緩沖液 |
5ul |
脫氧核苷酸 |
1ul |
引物A |
0.5ul |
引物B |
0.5ul |
DNA聚合酶 |
0.5U |
模板DNA |
1-2ul |
加去離子水補足至50 ul |
①從上表中可得出,PCR技術(shù)與DNA復制相比較,主要區(qū)別之一是 。
此外,從反應條件看,所使用的DNA聚合酶應具有__________的特點。每次循環(huán)都需要2種引物的主要原因是_______________ ________________。
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科目:高中生物 來源:2011-2012學年天津市高三第二次月考生物試卷 題型:綜合題
氮素是合成蛋白質(zhì)及核酸等成分的最主要物質(zhì)。生物體中大約含有10%—15%的氮素,這種元素每年轉(zhuǎn)化量約在109噸到1010噸之間,而每年通過生物固氮所提供的氮素高達4×108噸。微生物在氮素循環(huán)中有著重要的作用,請回答下列問題:
(1)大氣中的N2變成植物體內(nèi)的氮需要 、 等兩類微生物
的共同作用;而動植物遺體中的氮回歸大氣中需要在 的情況下,由反
硝化細菌的作用來完成。
(2)雞糞發(fā)酵除臭是 細菌的作用,其同化作用的類型是 ,
在生態(tài)系統(tǒng)中的地位是 。
(3)固氮微生物中根瘤菌是非常有名的,它活躍在豆科植物的根部形成根瘤,與豆科植
物呈現(xiàn)良好的共生關(guān)系,其代謝類型是 ,在生態(tài)系統(tǒng)中的地位是 。
(4)圓褐固氮菌屬于自生固氮微生物,代謝類型為異養(yǎng)需氧型,在生態(tài)系統(tǒng)中的地位是 ,
它除具有固氮作用外,還能分泌 ,以促進植株的生長和果實的發(fā)育。
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