Question

【題目】【生物一選修3:現(xiàn)代生物科技】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入油菜葉片細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。

（1）從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，然后利用_____________技術(shù)分別進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）選用下圖中的限制酶________處理兩個(gè)基因后再用__________酶處理，得到_______（填圖中字母）端相連的融合基因。

（3）將上述融合基因插人上圖所示Ti質(zhì)粒的T一DNA中，構(gòu)建_____________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含____________的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是 ，進(jìn)一步培養(yǎng)篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜。

（4）用DNA—RNA分子雜交技術(shù)確定融合基因是否完成了_______________ 過(guò)程。

Answer 1

【答案】（15分，除標(biāo)注外每空2分）（1）PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）（1分）

（2）ClaI DNA 連接 A、D

（3）基因表達(dá)載體 四環(huán)素 將融合基因?qū)�人油菜葉片細(xì)胞并插入到其染色體DNA上

（4）轉(zhuǎn)錄

【解析】（1）依題意可知：酶D基因與轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因都屬于目的基因，擴(kuò)增目的基因，可利用PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)。

（2）酶D基因的A端與轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的D端均含有ClaI的識(shí)別位點(diǎn)，因此可選用ClaⅠ限制酶處理兩個(gè)基因后獲得相同的粘性末端，再用DNA連接酶處理，得到A、D端相連的融合基因 。

（3）將上述融合基因插入上圖所示Ti質(zhì)粒的T—DNA中，構(gòu)建基因表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。因用于構(gòu)建基因表達(dá)載體的Ti質(zhì)粒上有四環(huán)素抗性基因，所以成功導(dǎo)入基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，為將其篩選出來(lái)，可將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落。剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞并插入到其染色體DNA上，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜。

（4）確定融合基因是否完成了轉(zhuǎn)錄過(guò)程，可采用DNA—RNA分子雜交技術(shù)。