【題目】I.新一代基因編輯工具由 Cas9(一種限制性核酸內(nèi)切酶)和向?qū)NA構(gòu)成。該復(fù)合體能與DNA分子上的特定序列結(jié)合,并在合適位點切斷DNA雙鏈(如下圖所示)。DNA被切斷后,細胞會啟動DNA損傷修復(fù)機制,在此基礎(chǔ)上如果為細胞提供一個修復(fù)模板,細胞就會按照提供的模板在修復(fù)過程中引入片段插入或定點突變,從而實現(xiàn)基因編輯。請回答:

(1)在將編碼Cas9的基因?qū)胝婧思毎霓D(zhuǎn)基因操作中,若控制合成Cas9的基因序列已知,可用_______方法合成目的基因,再構(gòu)建表達載體導(dǎo)入真核細胞。上述轉(zhuǎn)基因操作成功的標(biāo)志________________

(2)如圖1所示,基因編輯工具發(fā)揮作用時,向?qū)NA分子的序列與基因組DNA中特定堿基序列因為堿基互補序列所以能結(jié)合在一起,然后由Cas9催化__________鍵斷裂,從而使 DNA分子斷裂。

(3)一般來說,在使用基因編輯工具對不同基因進行編輯時,應(yīng)使用Cas9和_____(填“相同”或“不同”)的向?qū)NA進行基因的相關(guān)編輯。

(4)如圖2所示,若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因,并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb,1kb=1000對堿基)上相應(yīng)的E—F區(qū)域(0.2kb)。已知在質(zhì)粒pZHZl中,限制酶G切割位點距限制酶E切割位點0.8kb,限制酶H切割位點距限制酶F切割位點O.5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品,據(jù)表所列為酶切結(jié)果。請將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點標(biāo)注在圖3中。_______

Ⅱ.青光眼是導(dǎo)致人類失明的三大致盲眼病之一,其中發(fā)育性青光眼(嬰幼兒型和青少年型)具有明顯的家族遺傳傾向。檢查發(fā)現(xiàn),發(fā)育型青光眼患者角膜小梁細胞中M蛋白異常。為研究其病因,研究者用含綠色熒光蛋白基因G或紅色熒光蛋白基因R的質(zhì)粒、正常人M蛋白基因(M+)或青光眼患者M蛋白基因(M-),構(gòu)建基因表達載體,分別導(dǎo)入Hela細胞中進行培養(yǎng),一段時間后檢測培養(yǎng)液和細胞中熒光的分布情況,實驗分組及檢測結(jié)果如下表(示只含熒光蛋白基因的質(zhì)粒片段;示含熒光蛋白基因和M蛋白基因的質(zhì)粒片段,此時兩基因表達的產(chǎn)物是一個整體)。

(1) 據(jù)下表推測,發(fā)育型青光眼的病因是_______異常導(dǎo)致其指導(dǎo)合成的M蛋白異常,導(dǎo)致小梁細胞中的M蛋白___________________,而在細胞中大量積累,最終導(dǎo)致小梁細胞功能異常。

(2)下表中第___________組實驗可以判斷:發(fā)育型青光眼是顯性遺傳病。

【答案】化學(xué) 控制Cas9基因的成功表達 磷酸二酯 不同 M蛋白基因 不能正常地分泌到細胞外 4組、5組、6組

【解析】

(1)獲得目的基因的方法:①從基因文庫中獲;②利用PCR技術(shù)擴增;③人工合成(化學(xué)合成)。原核生物的基因采取直接分離獲得,真核生物的基因一般是人工合成。

(2)DNA重組技術(shù)至少需要三種工具:限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶、運載體。

(3)目的基因的檢測與鑒定,常用基因探針--用放射性同位素(或熒光分子)標(biāo)記的含有目的基因DNA片段。

Ⅰ、分子水平上的檢測:①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因常用DNA分子雜交技術(shù);②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA常用分子雜交技術(shù);③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)常用抗原-抗體雜交技術(shù)。

Ⅱ、個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

I.(1)對于基因序列已知的目的基因可以通過DNA合成儀用化學(xué)法直接人工合成。轉(zhuǎn)基因成功的標(biāo)志是合成目的基因的產(chǎn)物,本題中應(yīng)為控制Cas9基因的成功表達。

(2)Cas9是一種限制性核酸內(nèi)切酶,催化脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵水解,從而使 DNA分子斷裂。

(3)如圖所示,基因編輯工具發(fā)揮作用時,向?qū)NA分子的序列與基因組DNA中特定堿基序列因為堿基序列互補所以能結(jié)合在一起,所以在使用基因編輯工具對不同基因進行編輯時,應(yīng)使用Cas9和不同的向?qū)NA進行基因的相關(guān)編輯。

(4)如圖2所示,若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因,并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb,1kb=1000對堿基)上相應(yīng)的E—F區(qū)域(0.2kb)。根據(jù)限制酶G和H單獨切割重組質(zhì)粒得到的兩個片段之和均為4.7kb,說明目的基因的長度為4.7+0.2-3.7=1.2kb,已知在質(zhì)粒pZHZl中,限制酶G切割位點距限制酶E切割位點0.8kb,限制酶H切割位點距限制酶F切割位點O.5kb,若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品,據(jù)表所列酶切結(jié)果可知,在重組質(zhì)粒上含有兩個限制酶G切割位點和兩個限制酶H切割位點,說明插入的目的基因上分別含有一個限制酶G切割位點和一個限制酶H切割位點,根據(jù)單獨使用限制酶G切割形成1.6kb和3.1kb兩段,由于GE為0.8kb,說明距離E位點0.8kb的目的基因上有一個限制酶G切割位點,同理,根據(jù)單獨使用限制酶H切割重組質(zhì)粒形成1.2kb和3.5kb兩段,由于FH為0.5kb,說明距離限制酶F切割位點的0.7kb的目的基因上有一個限制酶H切割位點(即距離質(zhì)粒上H點1.2kb的目的基因上有限制酶H的切割位點),綜上分析,目的基因上限制酶G切割位點和限制酶H切割位點之間的距離為0.3kb,故圖示如下:

Ⅱ.(1)根據(jù)1和2組實驗結(jié)果可知,在沒有M蛋白的情況下,熒光標(biāo)記只存在于細胞內(nèi),而和正常M蛋白基因連接后,熒光標(biāo)記出現(xiàn)在了培養(yǎng)液中,即正常M蛋白合成后會分泌到細胞外,但是和青光眼患者M蛋白基因連接后,細胞外將不會出現(xiàn)熒光標(biāo)記,由此可見,發(fā)育型青光眼的病因是M蛋白基因異常導(dǎo)致其指導(dǎo)合成的M蛋白異常,導(dǎo)致小梁細胞中的M蛋白不能正常地分泌到細胞外而在細胞中大量積累,最終導(dǎo)致小梁細胞功能異常。

(2)顯性遺傳病的個體只要含有致病基因就患病,結(jié)合上一小題的分析可知,表中第4組、5組、6組組實驗可以為“發(fā)育型青光眼是顯性遺傳病”這一結(jié)論提供重要證據(jù)。

練習(xí)冊系列答案
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A. 裝置1的紅色液滴向左移動的體積是細胞呼吸消耗O2的體積,裝置2的紅色液滴向右移動的體積是細胞呼吸釋放C02的體積

B. 只要裝置1的紅色液滴左移,就能說明萌發(fā)的種子既進行有氧呼吸也進行無氧呼吸

C. 20min后有可能觀察到裝置1和裝置2的紅色液滴都左移

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(1)圖1中是另一條多核苷酸鏈,則圖示過程為_________。

(2)若調(diào)查圖2中此病的發(fā)病率,調(diào)查的結(jié)果顯示,該地區(qū)此病的發(fā)病率為1%,則圖2中Ⅱ-8與一個表現(xiàn)型正常男性結(jié)婚后所生男孩患病的幾率是_____________。

(3)若圖2中Ⅱ-6和Ⅱ-7已不能提取相應(yīng)的遺傳物質(zhì),則要判斷9與該家庭的關(guān)系,可比較9與_____________的線粒體DNA序列。

(4)控制圖3的基因最可能位于________染色體上,主要理由是______________。

Ⅱ.下圖為哺乳動物的性染色體簡圖。X和Y染色體有一部分是同源的(圖中Ⅰ片段),該部分基因互為等位:另一部分是非同源的(圖中的Ⅱ,III片段),該部分基因不互為等位。從性遺傳又稱性控遺傳。從性遺傳是指常染色體上基因控制的性狀,在表現(xiàn)上受個體性別的影響的現(xiàn)象。在雜合體中雄性表現(xiàn)為有角,雌性表現(xiàn)為無角。

綿羊有角和無角受一對等位基因(A,a)控制,雌雄都有有角個體出現(xiàn),F(xiàn)有一只有角公羊與一只無角母羊交配所生的多胎小羊中,性成熟以后,凡公羊都表現(xiàn)為有角,凡母羊都表現(xiàn)為無角。試根據(jù)以上事實回答:(注:若性染色體上有角A基因為顯性)

(1)綿羊的有角基因A是否位于Ⅱ片段?_____________。理由是:_____________。

(2)根據(jù)以上事實。推測綿羊的有角性狀的遺傳有兩種可能:一種是位于性染色體上_____的遺傳,另一種從性遺傳,若是從性遺傳則無角母羊的基因型是:_____________。

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