Question

【題目】自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶統(tǒng)稱為熒光素酶。熒光素酶及其合成基因在生物研究中有著廣泛的利用。

（1）熒光素酶基因常被作為基因工程中的標(biāo)記基因，其作用是將_________篩選出來。

（2）為在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的熒光素酶基因可利用______________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（3）迄今為止，可將上述具有熒光素酶基因的運(yùn)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的技術(shù)，應(yīng)用最多的、最有效的方法是____________。經(jīng)一系列步驟，將所獲得的胚胎早期培養(yǎng)一段時(shí)間后，再移植到雌性動(dòng)物的__________或子宮內(nèi)，使其發(fā)育成為具有新性狀的動(dòng)物。

（4）為提高對(duì)胚胎的利用率，對(duì)早期胚胎可進(jìn)行的操作是___________。為確定熒光素酶基因是否在動(dòng)物體內(nèi)順利地表達(dá)，常采用的方法是___________________。

（5）下表為4種限制酶的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)，下圖為含有熒光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切點(diǎn)。若需利用酶切法（只用一種酶）獲得熒光素酶基因，最應(yīng)選擇的限制酶是 ____________。

Answer 1

【答案】含有目的基因的細(xì)胞 PCR 顯微注射技術(shù) 輸卵管 胚胎分割 抗原—抗體雜交 MspⅠ

【解析】

分析題圖：含有目的基因的外源DNA分子中含有限制酶BamHⅠ、SmaⅠ、MboⅠ和MspⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中BamHⅠ的酶切位點(diǎn)在目的基因的中間，SmaⅠ的酶切位點(diǎn)只有一個(gè)，限制酶Sma I的酶切位點(diǎn)中包含有限制酶Msp I的酶切位點(diǎn)，因此要獲得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。

（1）標(biāo)記基因的作用是將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。
（2）利用PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的熒光素酶基因。

（3）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法。經(jīng)一系列步驟，將所獲得的胚胎早期培養(yǎng)一段時(shí)間后，再移植到雌性動(dòng)物的輸卵管或子宮內(nèi)，可使其發(fā)育成為具有新性狀的動(dòng)物。

（4）對(duì)早期的胚胎進(jìn)行胚胎分割，可獲得更多相同基因型的胚胎，可以提高胚胎的利用率。檢測熒光素酶基因是否表達(dá)，分子水平上可采用抗原-抗體雜交的方法。

（5）要獲得目的基因必須在目的基因的兩側(cè)相應(yīng)的酶切位點(diǎn)進(jìn)行切割，根據(jù)上述分析可知，BamHⅠ的酶切位點(diǎn)在目的基因的中間，故不可�。籑boⅠ的酶切位點(diǎn)只有一個(gè)，故不可取；根據(jù)表格可以看出，SmaⅠ的識(shí)別序列中含有MspⅠ的識(shí)別序列，因此要獲得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。