Question

14．纖維素分子不能進(jìn)入酵母細(xì)胞，為了使酵母菌能夠利用環(huán)境中的纖維素為原料生產(chǎn)酒精，構(gòu)建了含3種不同基因片段的重組質(zhì)粒，下面是酵母菌轉(zhuǎn)化及纖維素酶在工程菌內(nèi)合成與運(yùn)輸?shù)氖疽鈭D．

據(jù)圖回答：
（1）本研究構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)看選用四種限制酶，其識(shí)別序列如圖，為防止酶切片段的自身環(huán)接，可選用的限制酶組合是B（或C）或C（或B）
A． ①②B． ①③C． ②④D． ③④

（2）設(shè)置菌株Ⅰ為對(duì)照，是為了驗(yàn)證質(zhì)粒DNA和酵母菌基因組不攜帶纖維素酶基因．
（3）纖維素酶基因的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，與菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中參與纖維素酶合成和分泌的細(xì)胞器還有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體．
（4）在以纖維素為唯一C源的培養(yǎng)基上分別培養(yǎng)菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株II不能存活，原因是缺少信號(hào)肽編碼序列，合成的纖維素酶不能分泌到胞外，細(xì)胞無可利用的碳源．
（5）酵母菌生產(chǎn)酒精的細(xì)胞部位是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，產(chǎn)生酒精時(shí)細(xì)胞的呼吸方式是無氧呼吸，在利用纖維素生產(chǎn)酒精時(shí)，菌株Ⅳ更具有優(yōu)勢，因?yàn)閷?dǎo)入的中重組質(zhì)粒含有A基因片段．使分泌的纖維素酶固定于細(xì)胞壁，減少因培養(yǎng)液更新二造成的酶的流失，提高酶的利用率．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）為防止酶切片段的自身連接，選用的限制酶組合產(chǎn)生的黏性末端應(yīng)不同，而限制酶①②產(chǎn)生的黏性末端相同，限制酶③④產(chǎn)生的黏性末端也相同，因此可選用的限制酶組合為①③或②④（①④或②③）．
（2）菌株Ⅰ不能合成纖維素酶，說明質(zhì)粒DNA和酵母菌基因組不攜帶纖維素酶基因．
（3）基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯過程．菌株Ⅱ的纖維素酶不能分泌到細(xì)胞外，而菌株Ⅲ的纖維素酶分泌到細(xì)胞外，菌株Ⅳ的纖維素酶分布在細(xì)胞壁上，因此與菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中參與纖維素酶合成和分泌的細(xì)胞器還有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體．
（4）在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上菌株Ⅱ不能存活，原因是菌株Ⅱ缺少信號(hào)肽編碼序列，合成的纖維素酶不能分泌到細(xì)胞外，細(xì)胞無可利用的碳源．
（5）酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳，酵母菌生成酒精的部位是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)．由于菌株Ⅳ導(dǎo)入的重組質(zhì)粒含有A基因片段，使分泌的纖維素酶固定于細(xì)胞壁，酶不會(huì)因培養(yǎng)液的更新而流失，因此在利用纖維素生產(chǎn)酒精時(shí)，菌株Ⅳ更具優(yōu)勢．
故答案為：
（1）B （或C）   C （或B）    
（2）質(zhì)粒DNA和酵母菌基因組
（3）轉(zhuǎn)錄    翻譯     內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體
（4）II     缺少信號(hào)肽編碼序列，合成的纖維素酶不能分泌到胞外，細(xì)胞無可利用的碳源
（5）細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)     無氧呼吸    A基因片段

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、分泌蛋白的合成與分泌及微生物的培養(yǎng)等相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟等，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確分析各小題．