【題目】如圖所示為A、B、C三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍(lán)色顯色基因。圖中EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ為兩種限制酶,質(zhì)粒上限制酶括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離;卮鹣铝袉栴}。

 

(1) 圖中三種質(zhì)粒中不能作為目的基因運(yùn)載體的是________,理由是________、________。

(2) 在基因工程的操作過程中,需要檢查目的基因是否重組到質(zhì)粒中,應(yīng)使用________酶切重組質(zhì)粒,完全酶切后,進(jìn)行電泳檢測(cè)。若電泳圖譜中出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.1kb和5.6 kb,或者________kb和________kb的片段,則可判斷該重組質(zhì)粒已與目的基因重組成功。

(3) 為研究目的基因D的功能,研究人員用下圖所示的引物組合分別擴(kuò)增D基因的D1片段、D3片段(DNA復(fù)制子鏈的延伸方向5′→3′)。

注:引物Ⅱ、Ⅲ上的x,y片段分別與N基因兩端互補(bǔ)配對(duì)

用引物Ⅰ、Ⅱ組合擴(kuò)增后,得到的絕大部分DNA片段是下圖中的________。

ab cd

②將大量N基因片段與擴(kuò)增得到的D1片段、D3片段置于PCR反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增,得到的絕大多數(shù)擴(kuò)增產(chǎn)物是________(填“D1-N”或“D1-D3一N”或“D3-N”或“D1-N—D3”)。

【答案】 質(zhì)粒A、質(zhì)粒C (質(zhì)粒A)缺少標(biāo)記基因 (質(zhì)粒C) 復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割 EcoR 3.1 3.6 d D1-N-D3

【解析】試題分析:分析題圖:如圖所示為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的DNA片段示意圖,圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍(lán)色顯色基因;EcoRⅠ(0.7Kb)、PvuⅠ(0.8Kb)等為限制酶及其切割的位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。

(1)圖中質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因;質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí),復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割,會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制.因此,能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒是B。(2)分析圖解可知,在目的基因上存在EcoRⅠ酶的切割位點(diǎn),因此在基因工程的操作過程中,需要檢查目的基因是否重組到質(zhì)粒中,應(yīng)使用該酶切重組質(zhì)粒.目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒長(zhǎng)度為2.7-0.1+(4.0-1.0)=5.6kb(質(zhì)粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時(shí)形成的大片段)、0.1+1.0=1.1kb(質(zhì)粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時(shí)形成的小片段)或2.7-0.1+1.0=3.6(質(zhì)粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時(shí)形成的小片段)、0.1+3.0=3.6(質(zhì)粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時(shí)形成的大片段)。

(3)①根據(jù)題圖分析,用引物Ⅰ、Ⅱ組合擴(kuò)增擴(kuò)增的是D1片段,以引物Ⅱ所在的單鏈為模板在引物Ⅰ的作用下合成DNA時(shí),引物Ⅱ上的X片段也被作為模板合成子鏈,因此得到的絕大部分DNA片段是圖3中的d。

②由于引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段都能與N基因兩條鏈上的堿基進(jìn)行互補(bǔ)配對(duì),因此將大量N基因片段與擴(kuò)增得到的D1片段、D3片段置于PCR反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增,得到的絕大多數(shù)擴(kuò)增產(chǎn)物是D1-N-D3,A2基因被敲除。

練習(xí)冊(cè)系列答案
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(2)腎小管上皮細(xì)胞中的Na+進(jìn)入組織液的方式是_______,影響其運(yùn)輸速率的因素有_____________,此運(yùn)輸方式體現(xiàn)了細(xì)胞膜的功能特點(diǎn)是具有________________。

(3)圖中可以看出,管腔中Na+進(jìn)入腎小管上皮細(xì)胞時(shí)的動(dòng)力來(lái)源于_______,圖2中存在3種信號(hào)分子,但只有1種信號(hào)分子能與其受體蛋白結(jié)合,這說明___________。

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C. CO2的固定形成的C3在相關(guān)酶作用下,可再生成C5

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