Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的________。

（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到________期時，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體�？梢愿鶕�(jù)Rag2基因的__________設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag2基因片段。用Hind?和Pst?限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有_____酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的_____，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實驗。

Answer 1

【答案】細(xì)胞核 囊胚 核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ 蛋白質(zhì)

【解析】

1、動物核移植的概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。

2、胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。

3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進(jìn)行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒。

4、目的基因分子水平上的檢測：

①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；

②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實驗前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核。

（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位于囊胚中，所以重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期。

（3）設(shè)計引物要遵循堿基互補配對原則，所以根據(jù)Rag2基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計。Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，所以表達(dá)載體應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位點。

（4）基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，所以提取小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交。