Question

【題目】下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，左圖、右圖中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶	BamH Ⅰ	BcIⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	G GATCC CCTAG G	T GATCA ACTAG T	GATC CTAG	A AGCTT TTCGA A

（1）根據(jù)表中的酶切位點(diǎn)，Sau3A I在質(zhì)粒上有________個(gè)酶切位點(diǎn)。用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用__________________兩種限制酶切割。

（2）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，對(duì)于該部位，________________。

A.BamH I酶和Bcl I酶都能切開 B.BamH I酶和Bcl I酶都不能切開

C.BamH I酶能切開，Bcl I酶不能切 D.BamH I酶不能切開，Bcl I酶能切開

（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)_________酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加_____________，平板上長(zhǎng)出的菌落。

（4）在一個(gè)典型的基因內(nèi)部，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（TSS）、轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)（TTS）、起始密碼子編碼序列（ATG）、終止密碼子編碼序列（TGA）的排列順序是____________。

A.ATG—TGA—TSS—TTS B.TSS—ATG—TGA—TTS

C.ATG—TSS—TTS—TGA D.TSS—TTS—ATG—TGA

Answer 1

【答案】3 BclI和HindⅢ B DNA連接酶 四環(huán)素 B

【解析】

分析題圖：左圖質(zhì)粒上，四環(huán)素抗性基因有BamH Ⅰ酶切割位點(diǎn)，氨芐青霉素抗性基因上有BcIⅠ酶、BamH Ⅰ酶、HindⅢ酶切割位點(diǎn)；目的基因兩端有BamH 、BcIⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ酶的切割位點(diǎn)。分析表格，BamH 、BcIⅠ、Sau3AⅠ三種酶切割的粘性末端相同。

（1）根據(jù)表格分析可知，Sau3A I在質(zhì)粒上有3個(gè)酶切位點(diǎn)。選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但BamH在質(zhì)粒上有兩個(gè)切割位點(diǎn)，會(huì)使質(zhì)粒中的啟動(dòng)子丟失，因此只能選BcIⅠ和HindⅢ酶。

（2）BamH I酶和Bcl I酶切割產(chǎn)生的粘性末端相同，但兩種酶識(shí)別的序列不同，所以若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接后，形成的DNA序列兩種酶都不能識(shí)別。

（3）酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒。由于重組質(zhì)粒中氨芐青霉素抗性基因被破壞，所以為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。

（4）已知基因的結(jié)構(gòu)包括編碼區(qū)和非編碼區(qū)，在編碼區(qū)的上游有啟動(dòng)子，其上含有轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（TSS）、在編碼區(qū)先有起始密碼子編碼序列（ATG），最后有終止密碼子編碼序列（TGA）、在非編碼區(qū)的下游有終止子，其上含有轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)（TTS），所以在一個(gè)典型的基因內(nèi)部，以上四種序列的排列順序是TSS-ATG-TGA-TTS。