Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽,具有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用,其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系.ET主要通過與靶細(xì)胞膜上的ET受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng).ETA是ET的主要受體,科研人員試圖通過構(gòu)建表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效表達(dá),為后期ETA的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評(píng)價(jià)等奠定基礎(chǔ).其過程如圖所示,圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為,限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為.請(qǐng)分析回答:

（1）完成過程①需要加入緩沖液、原料、引物、dNTP和_____酶等

（2）過程③和⑤中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使______鍵斷開,形成__________。

（3）構(gòu)建的重組表達(dá)載體,目的基因上游的啟動(dòng)子是__________的部位，進(jìn)而可驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。其中氨芐青霉素抗性基因的作用是___________。除圖中所標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，基因表達(dá)載體還應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是____________。

（4）過程⑥要用_____預(yù)先處理大腸桿菌,使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)細(xì)胞.

（5）將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因,其目的是有利于檢測______________________。

Answer 1

【答案】 反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄） 磷酸二酯 黏性末端 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合 篩選含有目的基因（ETA基因）的受體細(xì)胞 終止子 CaCl2 ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量

【解析】試題分析：①②③表示通過逆轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因，④表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，⑤表示限制酶切割質(zhì)粒，⑥表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，⑦表示目的基因的檢測。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，目的基因上游的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。將目的基因?qū)�入大腸桿菌時(shí)，需用Ca2+處理使其處于感受態(tài)，容易吸收外界DNA。SNAP基因是一種熒光蛋白基因，與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可用于檢測ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量。

（1）過程①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。（2）限制酶切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成黏性末端。（3）目的基因上游的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，從而驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。其中氨芐青霉素抗性基因是標(biāo)記基因，用于篩選含有目的基因（ETA基因）的受體細(xì)胞。基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因，所以除圖中所標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，還應(yīng)有終止子。（4）過程⑥將目的基因?qū)�入大腸桿菌，要用CaCl2處理，使之處于感受態(tài)，容易吸收外界DNA。（5）SNAP基因是一種熒光蛋白基因，與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可用于檢測ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量。