【題目】GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子.對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用.研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體(如圖1所示),并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中,用于干細(xì)胞基因治療的研究.請(qǐng)回答:
(1)在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)程中,使用胰蛋白酶的目的是
(2)構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時(shí),需選擇圖1中的限制酶進(jìn)行酶切.
(3)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接,連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種:?jiǎn)蝹(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示).為鑒定這3種連接方式,選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切,并對(duì)酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析,結(jié)果如圖2所示.圖中第泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的.
(4)將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后,為了檢測(cè)GDNF基因是否成功表達(dá),可用相應(yīng)的與提取的蛋白質(zhì)雜交.當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定的密度時(shí),需進(jìn)行培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞,用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn).

【答案】
(1)使細(xì)胞分散開(kāi)
(2)XhoⅠ
(3)②
(4)抗體;傳代
【解析】解:(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶作用,使細(xì)胞分散開(kāi).(2)質(zhì)粒上有XhoⅠ識(shí)別位點(diǎn),而且在啟動(dòng)子之后,所以選用XhoⅠ限制酶進(jìn)行酶切.(3)泳道①僅有一種條帶,屬于載體自連;泳道②有兩種條帶,且長(zhǎng)度分別與質(zhì)粒和GDNF基因長(zhǎng)度相同,為正向連接;泳道③有兩種條帶,長(zhǎng)度與BamHⅠ酶切后結(jié)果相同,為反向連接.(4)檢測(cè)基因是否表達(dá)采用抗原抗體雜交法.培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞采用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)法,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到一定程度,需要進(jìn)行分瓶,進(jìn)行傳代培養(yǎng). 故答案為:(1)使細(xì)胞分散開(kāi)(2)XhoⅠ(3)②(4)抗體 傳代
1、基因工程技術(shù)的基本步驟:(1)目的基因的獲。悍椒ㄓ袕幕蛭膸(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成.(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等.(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:根據(jù)受體細(xì)胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法.(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定:分子水平上的檢測(cè):①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子雜交技術(shù);②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA﹣﹣分子雜交技術(shù);③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)﹣﹣抗原﹣抗體雜交技術(shù).個(gè)體水平上的鑒定:抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等.2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程:取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中(原代培養(yǎng))→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液(傳代培養(yǎng))→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng).

練習(xí)冊(cè)系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】如圖是自然界碳循環(huán)的簡(jiǎn)圖,據(jù)圖分析下列敘述錯(cuò)誤的是(
A.甲為分解者,乙為消費(fèi)者,丙為生產(chǎn)者
B.碳元素以無(wú)機(jī)物形式在丙→乙→甲所示的渠道流動(dòng)
C.④表示大氣中CO2進(jìn)入生物群落的主要途徑
D.①②③表示CO2通過(guò)甲、丙、乙的作用進(jìn)入大氣中

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】我國(guó)科學(xué)家屠呦呦及其團(tuán)隊(duì)從青蒿中分離出青蒿素用于瘧疾的治療,這一措施至今挽救了全球數(shù)百萬(wàn)人的生命.青蒿中青蒿素的含量很低,科研工作者一直致力于提高青蒿素含量的研究.某研究小組給青蒿轉(zhuǎn)入青蒿素合成的關(guān)鍵基因fps,通過(guò)該基因的過(guò)量表達(dá)來(lái)提高青蒿素的產(chǎn)量.請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題.
(1)提取青蒿的總RNA,在酶作用下獲得青蒿的cDNA.
(2)根據(jù)基因fps的編碼序列設(shè)計(jì) , 通過(guò)得到目的基因,然后構(gòu)建含有fps基因的表達(dá)載體.為了便于篩選,表達(dá)載體中應(yīng)含有
(3)將表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞中,用此農(nóng)桿菌侵染無(wú)菌青蒿苗葉片,培養(yǎng)侵染后的葉片獲得幼苗.培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞發(fā)生的主要變化是
(4)將獲得的22株生長(zhǎng)健壯的轉(zhuǎn)基因青蒿苗移栽到大田里,待其生長(zhǎng)到現(xiàn)蕾期后收獲植株地上部分,測(cè)定青蒿素的含量,得到的結(jié)果如圖所示:
測(cè)定結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因青蒿植株中青蒿素含量最多約是對(duì)照組的倍.不同植株中青蒿素的含量 , 這可能是由于T﹣DNA整合到青蒿基因組的不同位置,使外源基因的引起的.

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】組成生物體的蛋白質(zhì)大多數(shù)是在細(xì)胞質(zhì)中的核糖體上合成的,各種蛋白質(zhì)合成之后要分別運(yùn)送到細(xì)胞中的不同部位,以保證細(xì)胞生命活動(dòng)的正常進(jìn)行.如圖表示分泌蛋白的合成、加工和運(yùn)輸過(guò)程,①、②、③表示細(xì)胞器,a、b、c表示某些過(guò)程.下列說(shuō)法中錯(cuò)誤的是(

A.①、②、③分別是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和線粒體
B.該過(guò)程可以說(shuō)明細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和功能之間具有密切的聯(lián)系
C.a表示脫水縮合過(guò)程,b、c表示蛋白質(zhì)的加工及運(yùn)輸過(guò)程
D.圖解中的過(guò)程在原核細(xì)胞中也可以進(jìn)行

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】當(dāng)環(huán)境溫度從25℃降到5℃時(shí),人體內(nèi)促甲狀腺激素含量、耗氧量及酶活性的變化情況分別為( )

A. 增加 不變 減少 B. 增加 增加 不變

C. 減少 增加 不變 D. 增加 減少 不變

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】胸苷在細(xì)胞內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶脫氧核苷酸,用含有3H胸苷的營(yíng)養(yǎng)液處理植物根尖分生區(qū)細(xì)胞,一段時(shí)間后,含有放射性的結(jié)構(gòu)有

細(xì)胞核 線粒體 葉綠體 核糖體 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 高爾基體

A①②③ B②③④ C①④ D①②

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】免疫系統(tǒng)功能過(guò)強(qiáng)或過(guò)弱,都會(huì)引起機(jī)體功能的紊亂。下列關(guān)于免疫系統(tǒng)功能異常引起的疾病,描述正確的是(。

A. 艾滋病人群患惡性腫瘤的比率與健康人相比沒(méi)有差異

B. 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病因是抗體與自身組織發(fā)生反應(yīng)引起自身免疫疾病

C. 過(guò)敏反應(yīng)中沒(méi)有淋巴細(xì)胞的參與

D. HIV主要通過(guò)感染人體B淋巴細(xì)胞,從而影響體液免疫

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】下列關(guān)于種群、群落的敘述,正確的是(。

A. 調(diào)查某地蒲公英的種群密度時(shí),所選擇的樣方數(shù)不會(huì)影響調(diào)查結(jié)果

B. 種群增長(zhǎng)的“S”型和“J”型曲線都是在K/2時(shí)種群數(shù)量增長(zhǎng)最快

C. 群落演替過(guò)程中其結(jié)構(gòu)越來(lái)越復(fù)雜,將來(lái)一定能形成森林

D. 群落的物種組成是區(qū)別不同群落的重要特征

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】如圖為物質(zhì)出入細(xì)胞的四種方式示意圖,請(qǐng)據(jù)圖回答:

(1)K+ , O2和葡萄糖三種物質(zhì)中,通過(guò)A方式進(jìn)入紅細(xì)胞的物質(zhì)是
(2)與A方式相比,B方式的主要特點(diǎn)是需要借助 , 該物質(zhì)是在細(xì)胞內(nèi)的上合成的.
(3)胰島B細(xì)胞分泌胰島素是通過(guò)方式進(jìn)行,該種運(yùn)輸方式也體現(xiàn)出細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn).

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