Question

【題目】下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用_________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)_____酶作用后獲得重組質(zhì)粒。

(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加_____，平板上長(zhǎng)出的菌落，常用 PCR 鑒定，所用的引物組成為圖2中_____。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 _____，對(duì)于該部位，這兩種酶_____(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開(kāi)。

Answer 1

【答案】 BclⅠ和HindⅢ (DNA)連接 四環(huán)素 引物甲和引物丙 都不能

【解析】本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對(duì)基因工程等知識(shí)的識(shí)記和理解能力，涉及到的知識(shí)有限制酶的作用、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因的檢測(cè)與鑒定。

(1) 圖中信息顯示：質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因中都存在BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，因此不能選擇BamHⅠ進(jìn)行酶切；目的基因的兩端和載體上都有BelⅠ和HindⅢ的酶切位點(diǎn)，可見(jiàn)，用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用BelⅠ和HindⅢ兩種限制酶切割。酶切后的載體和目的基因片段，再用DNA連接酶進(jìn)行連接。

(2) 因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，目的基因的插入破壞了氨芐青霉素抗性基因，但四環(huán)素抗性基因卻保持其結(jié)構(gòu)的完整性，所以轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌可在添加了四環(huán)素的培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出菌落。PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈，因此若用PCR鑒定圖2中的目的基因，所用的引物組成為引物甲和引物丙。

(3) 根據(jù)表格分析可知，經(jīng)BamHⅠ酶切割后產(chǎn)生的黏性末端為，經(jīng)BclⅠ酶切割后產(chǎn)生的的黏性末端為，即這兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端。若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ()，這兩種酶都不能識(shí)別該部位，因此都不能將該部位切開(kāi)。