【題目】(下面是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過(guò)程圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母,能將甲醇作為其唯一碳源。該酵母菌體內(nèi)無(wú)天然質(zhì)粒,科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體,其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組,將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。已知當(dāng)甲醇作為唯一碳源時(shí),該酵母菌中AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)(5A0X13AOX1TT)分別是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子)。請(qǐng)分析回答:

1)為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組,應(yīng)該選擇______切割質(zhì)粒,并在HBsAg基因兩側(cè)的AB位置接上______,這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是______

2)酶切獲取HBsAg基因后,需用______將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上,形成重組質(zhì)粒,并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取______。

3)步驟3中應(yīng)選用限制酶______來(lái)切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA,然后再將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。

4)為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功,在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入______以便篩選;若要檢測(cè)轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,可以用______方法進(jìn)行檢測(cè)。

5)轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后,需要向其中加入______以維持其生活,同時(shí)誘導(dǎo)HBSAg基因表達(dá)。

【答案】SnaB I、Avr 相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列 確保定向連接(避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連) DNA連接酶 大量重組質(zhì)粒 BgI 卡拉霉素 分子雜交 甲醇

【解析】

分析題圖該題考查基因工程的基本操作程序,結(jié)合題圖及題干信息,綜合運(yùn)用所學(xué)知識(shí)逐項(xiàng)作答。

(1)分析題圖:SnaB、AvrⅡ、BglⅡ和SacI限制酶切割位點(diǎn),其中SacI位于啟動(dòng)子上,BglⅡ位于終止子上。為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組,只能用限制酶SnaB和AvrⅡ切割質(zhì)粒,并在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列,這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是確保定向連接(避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連)。

(2)酶切獲取HBsAg基因后,需用DNA連接酶將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上,形成重組質(zhì)粒,并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取大量重組質(zhì)粒。

(3)結(jié)合(1),步驟3中應(yīng)選用限制酶BgIⅡ來(lái)切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA,然后再將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。

(4)5′AOX1--3′AOX1段基因含有卡拉霉素抗性基因,為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功,在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入卡拉霉素以便篩選;若要檢測(cè)轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,可以用分子雜交方法進(jìn)行檢測(cè)。

(5)轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后,需要向其中加入甲醇以維持其生活,同時(shí)誘導(dǎo)HBSAg基因表達(dá)。

練習(xí)冊(cè)系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】下圖表示動(dòng)物細(xì)胞中重要有機(jī)物A、B、C、D、E的元素組成及相互關(guān)系,其中X、Y代表某些化學(xué)元素,ab、c分別為A、B、C的單體。據(jù)圖回答:

1Y代表的元素為______。

2D所代表的具有參與血液中脂質(zhì)運(yùn)輸作用的物質(zhì)名稱是__________;構(gòu)成生物膜支架的E的合成場(chǎng)所主要是_________。

3)圖中能攜帶遺傳信息的物質(zhì)名稱是___________

4)某C物質(zhì)由n個(gè)c組成且僅為一條鏈,其分子式為CmHpNqOwS2,并且是由下列4c組成的,那么該物質(zhì)徹底水解后將會(huì)得到丙數(shù)目為_________。

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】下圖為某動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞分裂的一組圖像,下列敘述錯(cuò)誤的是(

A.細(xì)胞中含有8條染色體

B.細(xì)胞、、產(chǎn)生的子細(xì)胞中均有同源染色體

C.上圖中表示有絲分裂的細(xì)胞及其分裂順序是⑤→③→①

D.細(xì)胞分裂形成精細(xì)胞

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】圖為某物質(zhì)的合成與分泌過(guò)程示意圖,甲、乙、丙、丁、戊表示細(xì)胞結(jié)構(gòu)。其中甲、戊中含有RNA。下列說(shuō)法中不正確的是(  )

A. 圖示過(guò)程可體現(xiàn)生物膜系統(tǒng)在結(jié)構(gòu)和功能上的相互聯(lián)系

B. 圖示過(guò)程的實(shí)現(xiàn)與生物膜上的脂質(zhì)分子、蛋白質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)有關(guān)

C. 在圖中戊結(jié)構(gòu)內(nèi),丙酮酸氧化分解產(chǎn)生CO2的階段沒(méi)有O2參加

D. X的分泌過(guò)程能發(fā)生在無(wú)甲、乙、丙、丁、戊等結(jié)構(gòu)的原核細(xì)胞中

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】如圖1所示的甲、乙、丙三個(gè)滲透裝置中,三個(gè)漏斗頸的內(nèi)徑相等,漏斗內(nèi)盛有濃度相同的蔗糖濃液,且漏斗內(nèi)液面高度相同,漏斗口均封以半透膜,置于同一個(gè)水槽的清水中。三個(gè)滲透裝置的半透膜的面積和所盛蔗糖溶液的體積不同,如下表所示。

裝置編號(hào)




半透膜面積

S

S/2

S

蔗糖溶液體積

T

T

2T

2中曲線1、23表示漏斗液面高度隨時(shí)間的變化情況。則曲線12、3與甲、乙、丙三個(gè)裝置的對(duì)應(yīng)關(guān)系是 (  )

A. 1-丙;2-甲;3-乙 B. 1-乙;2-甲;3-丙

C. 1-甲;2-乙;3-丙 D. 1-丙;2-乙;3-甲

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】1952年,赫爾希和蔡斯利用同位素標(biāo)記法,完成了著名的噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)包括4個(gè)步驟:分別用噬菌體侵染細(xì)菌;35S32P分別標(biāo)記噬菌體;進(jìn)行放射性檢測(cè);培養(yǎng)液攪拌后離心分離;卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題。

1)該實(shí)驗(yàn)步驟的正確順序是_____。

A①②④③ B④②①③ C②①④③ D②①③④

2)下圖中錐形瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液是用來(lái)直接培養(yǎng)_____的,其內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)成分中能否含有32P? _____

(注:圖中AC中的方框代表大腸桿菌)

3)要讓放射性同位素主要分布在圖中離心管的上清液中,則獲得該實(shí)驗(yàn)中的噬菌體的培養(yǎng)方法是______。

A.用含35S的培養(yǎng)基直接培養(yǎng)噬菌體

B.用含32P的培養(yǎng)基直接培養(yǎng)噬菌體

C.用含35S的培養(yǎng)基細(xì)菌,在用此細(xì)菌培養(yǎng)噬菌體

D.用含32p的培養(yǎng)基細(xì)菌,在用此細(xì)菌培養(yǎng)噬菌體

4)連續(xù)培養(yǎng)噬菌體n代,則含親代噬菌體DNA的個(gè)數(shù)應(yīng)占總數(shù)的_____

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】五個(gè)大小相同的馬鈴薯幼根與物種A的幼根分別放入甲—戊五種不同濃度的蔗糖溶液中,數(shù)小時(shí)后,取出稱重,重量變化如圖所示。以下關(guān)于該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)法不正確的是

A.與馬鈴薯幼根細(xì)胞液等滲的溶液是甲溶液

B.馬鈴薯比物種A更耐旱

C.物種A幼根的細(xì)胞在甲濃度溶液中一定會(huì)發(fā)生明顯的質(zhì)壁分離

D.在這五種蔗糖溶液中,濃度最大的是乙溶液

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】如圖甲、乙、丙是某高等動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生的細(xì)胞分裂模式圖,圖丁為某一時(shí)刻部分染色體行為的示意圖,在無(wú)基因突變的情況下,下列說(shuō)法正確的是()

A. 若丁發(fā)生在丙細(xì)胞形成的過(guò)程中,最終產(chǎn)生的子細(xì)胞基因組成有2種或4

B. A基因在圖甲中的1號(hào)染色體上,則a基因在4號(hào)和8號(hào)染色體上

C. 由于同源染色體分開(kāi),非同源染色體自由組合乙細(xì)胞可分裂產(chǎn)生兩種子細(xì)胞

D. 若丁圖表示發(fā)生在減數(shù)第一次分裂的四分體時(shí)期,則①和②都發(fā)生了染色體變異

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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:

【題目】牛奶是日常生活中經(jīng)常食用的乳制品,對(duì)人體健康有很大好處。環(huán)?萍寂d趣小組從某牛奶廠排污口獲取水樣,希望從中篩選出能高效降解蛋白質(zhì)的細(xì)菌。據(jù)有關(guān)知識(shí)回答下列問(wèn)題。

(1)對(duì)牛奶進(jìn)行消毒常用的方法是_________,其優(yōu)點(diǎn)是________________。

(2)為實(shí)現(xiàn)篩選目的,該興趣小組使用了如下配方的培養(yǎng)液。

在配制培養(yǎng)液時(shí)________(不能)將該配方中的蛋白質(zhì)換成葡萄糖,原因是_______

(3)為實(shí)現(xiàn)目的菌株的分離和計(jì)數(shù),應(yīng)在該配方中加入______________,制成平板,常用的接種方法是_________________。為檢測(cè)所使用的平板滅菌是否徹底或是否被污染,操作方法是_________。

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