Question

【題目】如圖是將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

（1）將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒時，用同一種限制性內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的 ，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。

（2）目前把重組質(zhì)粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質(zhì)粒；有的導入的是普通質(zhì)粒A；只有少數(shù)導入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：將得到的細菌涂抹在一個含有 的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件 、 。

（3）若進一步鑒定證明細菌中導入的是普通質(zhì)粒A還是重組質(zhì)粒，將得到的細菌涂抹在一個含有 的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌 ，則導入的是普通質(zhì)粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應該用 作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，主要是借鑒 的途徑。

（5）目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌B。從變異的來源看，此變異屬于 。導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是 。

Answer 1

【答案】（1）DNA連接酶

（2）四環(huán)素 具有標記基因 能在宿主細胞內(nèi)復制并穩(wěn)定的保存

（3）氨芐青霉素 能生長 放射性同位素（或熒光分子）標記的生長激素基因

（4）細菌或病毒侵染細胞

（5）基因重組 受體細胞通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程合成出相應的蛋白質(zhì)（生長激素）

【解析】

試題分析：（1）DNA連接酶可以修復限制性核酸內(nèi)切酶切開的磷酸二酯鍵。

（2）質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件是具有標記基因和能在宿主細胞內(nèi)復制并穩(wěn)定的保存。質(zhì)粒A含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因，導入人的生長激素基因后，抗氨芐青霉素基因被破壞，而抗四環(huán)素基因結(jié)構(gòu)正常，故導入質(zhì)粒A和重組質(zhì)粒的細菌，可以表達出四環(huán)素抗性蛋白，因而可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上存活。

（3）普通質(zhì)粒A含有抗氨芐青霉素基因和抗四環(huán)素基因，可以表達出氨芐青霉素抗性蛋白和四環(huán)素抗性蛋白，而重組質(zhì)粒只含有抗四環(huán)素基因，只能表達出四環(huán)素抗性蛋白。故將細菌培養(yǎng)在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠存活的是普通質(zhì)粒。普通質(zhì)粒A沒有人的生長激素基因，而重組質(zhì)粒含有人的生長激素基因，故用放射性同位素（或熒光分子）標記的生長激素基因作為探針，可以將兩種質(zhì)粒區(qū)別開來。

（4）因為受體細胞是細菌，所以將體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。

（5）“工程菌”的變異屬于基因重組。導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是受體細胞通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程合成出相應的蛋白質(zhì)（生長激素）。