Question

【題目】生物興趣小組試圖探究山羊的瘤胃中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO47H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
瓊脂	15g
溶解后自來水定容到1000mL

（1）該實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基在成分上的特殊要求是___ 。培養(yǎng)基中葡萄糖可以為細(xì)菌提供___ 。

（2）實(shí)驗(yàn)中所用錐形瓶、試管都必須進(jìn)行滅菌，常用的滅菌方法是___。圖中接種的方法為___ 法，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。實(shí)驗(yàn)過程中，除了需將接種后的平板放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)一段時(shí)間，還需設(shè)置一在相同條件下培養(yǎng)的“未接種的空白平板”的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，其目的是___。

（3）為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果見下表，其中___倍的稀釋比較合適。用該方法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)目會(huì)比實(shí)際數(shù)目___（偏大/基本相同/偏小），其原因是___ 。

稀釋倍數(shù)	103	104	105	106	107
菌落數(shù)	>500	367	248	36	18

Answer 1

【答案】以尿素作為唯一氮源 碳源（和能量） 干熱滅菌（或高壓蒸汽滅菌） 稀釋涂布平板 檢查培養(yǎng)基平板滅菌是否合格和培養(yǎng)過程中是否受到污染 106或105 偏小 因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落（一個(gè)菌落可能是一個(gè)或多個(gè)菌體增殖形成）

【解析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對(duì)異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營(yíng)養(yǎng)要素成分時(shí)并不是起單一方面的作用。

2、兩種純化細(xì)菌的方法的比較

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)	適用范圍
平板劃線分離法	可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離	不能計(jì)數(shù)	適用于好氧菌
稀釋涂布平板法	可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征	吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延	適用于厭氧，兼性厭氧菌

3、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

（1）該實(shí)驗(yàn)需要篩選到能降解尿素的細(xì)菌，因此所用培養(yǎng)基在成分上的特殊要求是以尿素作為唯一氮源；培養(yǎng)基中葡萄糖可以為細(xì)菌提供碳源。

（2）實(shí)驗(yàn)中所用錐形瓶、試管都必須進(jìn)行滅菌，常用的滅菌方法是干熱滅菌或高壓蒸汽滅菌。圖中接種的方法為稀釋涂布平板法，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。實(shí)驗(yàn)過程中，除了需將接種后的平板放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)一段時(shí)間，還需設(shè)置一在相同條件下培養(yǎng)的“未接種的空白平板”的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，其目的是檢查培養(yǎng)基平板滅菌是否合格和培養(yǎng)過程中是否受到污染。

（3）觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)選30-300之間的培養(yǎng)皿進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，根據(jù)表格數(shù)據(jù)確定，應(yīng)選106或105倍的稀釋比較合適。用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)目會(huì)比實(shí)際數(shù)目偏小，其原因是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。