Question

【題目】在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，基因是選擇性表達(dá)的。某真核生物，要想獲得極為稀少的mRNA及其克隆，可以用下圖所示的差異雜交法。Poly（A)是指位于mRNA上的150-200個(gè)腺苷酸殘基。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（1）利用表達(dá)目的mRNA的細(xì)胞獲得放射性標(biāo)志的探針時(shí)，需要用________酶，可以用_______作為引物。

（2）用羥基磷灰石柱層析法，回收______________（填“未雜交的32P標(biāo)記的單鏈DNA”或“雜交分子”），用構(gòu)建________（填“基因組”或“cDNA”）文庫(kù)。

（3）在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，由于基因選擇性表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞__________，該過(guò)程的結(jié)果使多細(xì)胞生物體中的細(xì)胞趨向____________，有利于提高各種生理功能的效率。

（4）若用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達(dá)目的mRNA細(xì)胞中獲得的單鏈DNA雜交，可能形成雜合雙鏈區(qū)和游離的單鏈區(qū)，原因是_________________________________________________________。

Answer 1

【答案】（1）逆轉(zhuǎn)錄酶 Poly （A)

（2）未雜交的32P標(biāo)記的單鏈DNA cDNA

（3）分化 專門(mén)化

（4）DNA分子中含有內(nèi)含子、非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒(méi)有互補(bǔ)的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以出現(xiàn)游離單鏈區(qū)。DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有互補(bǔ)的堿基序列，互補(bǔ)堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)。

【解析】

試題分析：（1）依題意并結(jié)合圖示分析可知：利用表達(dá)目的mRNA的細(xì)胞獲得放射性標(biāo)志的探針時(shí)，是以總Poly（A)—mRNA為模板通過(guò)反轉(zhuǎn)錄合成，因此需用逆轉(zhuǎn)錄酶。由題意“Poly （A)是指位于mRNA上的150-200個(gè)腺苷酸殘基”可知，可以用Poly （A) 作為引物。

（2）圖示中未雜交的32P標(biāo)記的單鏈DNA是以目的mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成，只含有某真核生物的部分基因，所以在構(gòu)建基因文庫(kù)時(shí)，用羥基磷灰石柱層析法，回收的是未雜交的32P標(biāo)記的單鏈DNA，所構(gòu)建的基因文庫(kù)屬于cDNA文庫(kù)。

（3）在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，由于基因選擇性表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞分化。細(xì)胞分化的結(jié)果使多細(xì)胞生物體中的細(xì)胞趨向?qū)ｉT(mén)化，有利于提高各種生理功能的效率。

（4）DNA分子中含有內(nèi)含子、非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒(méi)有與之互補(bǔ)的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達(dá)目的mRNA細(xì)胞中獲得的單鏈DNA雜交，會(huì)出現(xiàn)游離單鏈區(qū)；DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有與之互補(bǔ)的堿基序列，互補(bǔ)堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)，因此用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達(dá)目的mRNA細(xì)胞中獲得的單鏈DNA雜交，會(huì)形成雜合雙鏈區(qū)。