Question

【題目】某研究所以馬尾藻巖藻聚糖（SF）為研究對象，體外培養(yǎng)小鼠肉瘤細胞S180，做抗腫瘤活性實驗的研究。下列為部分實驗步驟與結(jié)果。

實驗步驟：

①將S180腫瘤細胞以RPMI1640為培養(yǎng)液，在5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

②將上述培養(yǎng)過的S180腫瘤細胞經(jīng)酶消化，按1×103～1×105個·mL-1接種到96孔培養(yǎng)板，適宜條件下培養(yǎng)24h、48h、72h、96h后，以MTT法（又稱比色法，一種檢測細胞存活和生長的方法）于波長490nm處測定OD值，結(jié)果如圖1。

③在適宜的培養(yǎng)條件和恰當(dāng)?shù)?/span>S180腫瘤細胞接種濃度下，研究不同濃度（0mg·mL-1、0．1mg·mL-1、0．5mg·mL-1、1mg·mL-1、2mg·mL-1、4mg·mL-1、8mg·mL-1、10mg·mL-1、15mg·mL-1、20mg·mL-1、25mg·mL-1、30mg·mL-1）的SF對S180腫瘤細胞增殖的抑制情況，96h后以MTT法于波長490nm處測定OD值，結(jié)果如圖2。

請回答下列問題：

（1）步驟①中以RPMI1640為培養(yǎng)液培養(yǎng)S180腫瘤細胞的原理是__________。培養(yǎng)液中除細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)之外，通常還添加一定量的__________，以防培養(yǎng)過程中的污染。

（2）步驟②中“消化”所使用的酶是__________，為減少OD值測定的誤差，應(yīng)注意__________。

（3）已知在一定細胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT法測得的OD值與活細胞數(shù)量呈正相關(guān)，由圖1可知步驟③中恰當(dāng)?shù)?/span>S180腫瘤細胞接種濃度為__________個·mL-1。

（4）圖2實驗結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)SF濃度與細胞增殖的抑制作用呈__________（選填“正相關(guān)”或“負相關(guān)），當(dāng)SF濃度達到__________mg·mL-1時細胞增殖的抑制作用達到極限，繼續(xù)增加SF濃度對細胞增殖的抑制作用變化不明顯。

Answer 1

【答案】細胞增殖 抗生素 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 多測量，取平均值 5×103 正 25

【解析】

（1）動物細胞培養(yǎng)的原理：細胞增殖。動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)；動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具應(yīng)進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害。②營養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。在使用合成培養(yǎng)基時通常需加入血清、血漿等一些天然成分。③溫度和PH。④氣體環(huán)境：細胞所需的氣體主要是O2和CO2。

（2）根據(jù)題干信息，在一定細胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT法測得的OD值與活細胞數(shù)量呈正相關(guān)，圖2表示S180腫瘤細胞在不同濃度SF作用下生長曲線，SF濃度越大OD值越小，腫瘤細胞的數(shù)量越少，說明SF抑制腫瘤細胞的增殖。

（1）培養(yǎng)腫瘤細胞的原理是細胞增殖。培養(yǎng)液中除細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)之外，通常還添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。

（2）步驟②中“消化”所使用的酶是胰蛋白酶，其作用是使動物組織細胞分散開，以獲得細胞懸液。在實驗中求平均值可以減少實驗誤差，所以為減少OD值測定的誤差,應(yīng)注意多次測量并求平均值。

（3）已知在一定細胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT法測得的OD值與活細胞數(shù)量呈正相關(guān)，所以由圖1可知步驟③中恰當(dāng)?shù)?/span>S-180腫瘤細胞接種濃度為5×103個·mL-1。

（4）圖2實驗結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)，SF濃度與細胞增殖的抑制作用呈正相關(guān)，當(dāng)SF濃度達到25mg·mL-1時細胞增殖的抑制作用達到極限，繼續(xù)增加SF濃度對細胞增殖的抑制作用變化不明顯。