Question

【題目】為了提高人類對(duì)疾病產(chǎn)生原因的認(rèn)識(shí)，需要確定基因在染色體的具體位置，基因定位的方法很多，近年興起的以STR作為遺傳標(biāo)記具有很大的優(yōu)越性。STR是真核生物DNA中廣泛存在的簡單重復(fù)序列，以16個(gè)核苷酸為一個(gè)單元，重復(fù)次數(shù)在不同個(gè)體間存在差異。某正常女性7號(hào)染色體的STR位點(diǎn)如圖所示。請(qǐng)分析回答：

（1）若需要將7號(hào)染色體的STR提取出來，就要在STR兩側(cè)找到____________酶的切點(diǎn)進(jìn)行“切割”，切斷的化學(xué)鍵是____________。

（2）若需要一定量的STR用于研究，由于（GATA）8（GATA）14比較小，可以通過DNA合成儀用________方法直接人工合成。

（3）圖中STR還可用于親子鑒定，此時(shí)需要大量的STR。因?yàn)橐阎?/span>____________，可根據(jù)其合成引物，然后利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系中除了緩沖液、模板、dNTP、引物外，還需要添加____________。

（4）DNA分子雜交也可以進(jìn)行基因定位，若想確定該女性是否攜帶紅綠色盲基因，可用標(biāo)記的_______為探針，與____________染色體DNA分子進(jìn)行雜交篩選，若顯示出____________，說明該女性攜帶紅綠色盲基因。

Answer 1

【答案】限制（酶） 磷酸二酯鍵 化學(xué) （上述STR的）核苷酸序列 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶） （含有）紅綠色盲基因（的DNA片段）\（含有）紅綠色盲基因（的DNA單鏈） X 雜交帶

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：

分子水平上的檢測：

①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；

②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）要將目的基因STR提取出來，就要在目的基因STR兩側(cè)找到限制酶的切點(diǎn)進(jìn)行“切割”，其切斷的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵。

（2）由于STR相對(duì)分子量比較小，可以通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。

（3）因?yàn)?/span>STR的核苷酸序列已知，可根據(jù)其合成引物，然后利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)在較高溫度下進(jìn)行，體系中除了緩沖液、模板、dNTP、引物外，還需要添加熱穩(wěn)定DNA聚合酶。

（4）若想用DNA分子雜交確定該女性是否攜帶紅綠色盲基因，因紅綠色盲基因位于X染色體上，可用標(biāo)記的紅綠色盲基因?yàn)樘结�，與X染色體DNA分子進(jìn)行雜交篩選，若顯示出雜交帶，說明該女性攜帶紅綠色盲基因。