Question

現(xiàn)代生物科技專題

肺細(xì)胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實驗表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖１。

請回答：

（１）進行過程①時，需用　　　　酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)用RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為　　　　。

（２）進行過程②時，需用　　　　酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。

（３）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響RAS的表達，其影響機理如圖２。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞提取　　　　進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中　　　　（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。

 

Answer 1

【答案】

（10分）（1）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制）   啟動子

（2）胰蛋白

（3）RNA   RAS蛋白

【解析】（1）過程①表示基因表達載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結(jié)合和識別的位點，RNA聚合酶結(jié)合到該位點，可驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程。

（2）過程②表示動物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進行傳代培養(yǎng)。

（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來進行，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發(fā)肺癌”導(dǎo)入let7基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白質(zhì)含量減少進而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。

考點定位：本題主要考查有關(guān)基因工程和細(xì)胞工程中的知識，涉及的知識點主要有表達載體的構(gòu)建、目的基因的檢測、動物細(xì)胞培養(yǎng)等。屬于對識記層次的考查。