Question

【題目】（一）在冬季，部分地區(qū)出現(xiàn)嚴(yán)重霧霾，這與秸稈野外焚燒有一定關(guān)系。為破解秸稈處理瓶頸，微生物專(zhuān)家力圖通過(guò)微生物降解技術(shù)使秸稈盡快腐爛掉，增加土壤肥力并緩解環(huán)境污染�；卮鹣铝杏嘘P(guān)問(wèn)題：

（1）微生物專(zhuān)家發(fā)現(xiàn)某些細(xì)菌可以將纖維素分解為葡萄糖來(lái)提供營(yíng)養(yǎng)。為從發(fā)黑的樹(shù)干上分離出有分解纖維素能力的高產(chǎn)菌株，制備了以________為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，將菌液進(jìn)行一系列_____后，用_____（工具）將其涂布在培養(yǎng)基上得到單個(gè)菌落，再采用剛果紅染色方法進(jìn)行鑒定，得到目標(biāo)菌落。那么，圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是__（填圖中序號(hào)）。

（2）研究人員欲將篩選得到的纖維素分解菌進(jìn)行大量培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)保持恒溫箱中的溫度約為__（填“4℃”、“20℃”或“35℃”）。若用稀釋涂布法計(jì)數(shù)菌體數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果通常比實(shí)際數(shù)目___，主要原因是_______________________。

（二）如圖表示動(dòng)物細(xì)胞克隆和制備單克隆抗體的相關(guān)過(guò)程。請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：

注：干細(xì)胞具有較強(qiáng)的分裂能力

（1）過(guò)程①常采用_____法導(dǎo)入重組誘導(dǎo)基因后得到干細(xì)胞；部分干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)可分化成全身的不同組織或器官，是因?yàn)檫@些細(xì)胞具有__。

（2）該過(guò)程利用了甲細(xì)胞具有_____的能力，甲和乙細(xì)胞可經(jīng)過(guò)生物誘導(dǎo)劑____的作用形成丙細(xì)胞。取一個(gè)丙細(xì)胞，放在含大量失去增殖力的小鼠成纖維細(xì)胞的特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)_______，這種方法為克隆培養(yǎng)法。

（3）在細(xì)胞內(nèi)DNA合成一般有兩條途徑。主要途徑是在細(xì)胞內(nèi)由糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，而氨基喋呤可以阻斷此途徑；另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下，經(jīng)酶催化合成 DNA，而甲細(xì)胞的DNA合成沒(méi)有此輔助途徑。

①利用兩條DNA合成途徑的不同特點(diǎn)配制的相應(yīng)培養(yǎng)基含有多種成分，其中添加的_______成分具有篩選丙細(xì)胞的作用。

②最終篩選獲得的丙細(xì)胞的特點(diǎn)是__________________。

Answer 1

【答案】纖維素梯度稀釋玻璃刮刀①35℃少當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落顯微注射全套的遺傳信息連續(xù)增殖（滅活的）病毒D細(xì)胞群（細(xì)胞株）氨基喋呤能無(wú)限增殖并分泌特異性抗體

【解析】

本題考查微生物的分離與計(jì)數(shù)、動(dòng)物細(xì)胞工程，考查對(duì)分離纖維素分解菌、制備單克隆抗體技術(shù)流程的理解和識(shí)記。解答此題，可根據(jù)培養(yǎng)皿中透明圈的大小選擇有分解纖維素能力的高產(chǎn)菌株，根據(jù)乙細(xì)胞的來(lái)源判斷甲、乙細(xì)胞應(yīng)具備的特點(diǎn)。

（1）根據(jù)微生物的營(yíng)養(yǎng)需求，分離有分解纖維素能力的高產(chǎn)菌株，應(yīng)以纖維素為唯一碳源配制選擇培養(yǎng)基。將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋后，用玻璃刮刀將其涂布在培養(yǎng)基上，以得到單個(gè)菌落。在含有剛果紅的培養(yǎng)基上，纖維素可以與剛果紅結(jié)合呈現(xiàn)紅色，纖維素被降解后紅色消失，據(jù)圖可知圖中菌株①周?chē)�的透明圈最大，即降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是①。

（2）纖維素分解菌生活的的適宜溫度較高，大量培養(yǎng)時(shí)恒溫箱中的溫度約為35℃。用稀釋涂布法計(jì)數(shù)菌體數(shù)時(shí)，由于連在一起的兩個(gè)或多個(gè)菌體增殖后形成一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)結(jié)果通常比實(shí)際數(shù)目小。

（二）（1）將基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法，經(jīng)誘導(dǎo)得到的干細(xì)胞含有小鼠生長(zhǎng)、發(fā)育所需要的全套遺傳信息，所以部分干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)可分化成全身的不同組織或器官。

（2）H1N1病毒外殼注入小鼠體內(nèi)，可刺激小鼠產(chǎn)生體液免疫，產(chǎn)生能分泌特定抗體的漿細(xì)胞乙，由于漿細(xì)胞高度分化，不能增殖，可與具有連續(xù)增殖能力的甲細(xì)胞經(jīng)滅活病毒誘導(dǎo)，融合為丙細(xì)胞。取一個(gè)細(xì)胞，使之繁衍成一個(gè)細(xì)胞群（細(xì)胞株），這種方法稱(chēng)為克隆培養(yǎng)法。

（3）①甲細(xì)胞沒(méi)有DNA合成的輔助途徑，只有主要途徑，在含有氨基喋呤的培養(yǎng)基上，甲細(xì)胞的DNA合成途徑被阻斷，漿細(xì)胞含有DNA合成的兩條途徑，但不增殖，只有丙細(xì)胞可利用漿細(xì)胞DNA合成的輔助途徑進(jìn)行DNA的合成，從而篩選出丙細(xì)胞。

②丙細(xì)胞具備了甲、乙細(xì)胞特點(diǎn)，表現(xiàn)為能無(wú)限增殖并分泌特異性抗體。

項(xiàng)目	第一次篩選	第二次篩選
篩選 原因	誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞	由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以需經(jīng)過(guò)選擇性培養(yǎng)
篩選 方法	用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng)	用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開(kāi)始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群
篩選 目的	得到雜交瘤細(xì)胞	得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞