Question

【題目】研究人員從海底微生物中分離到一種在低溫下有催化活性的α-淀粉酶A3，并對(duì)其進(jìn)行了研究。回答下列問(wèn)題：

（1）在以淀粉為底物測(cè)定A3酶活性時(shí)，既可檢測(cè)淀粉的減少，檢測(cè)應(yīng)采用的試劑是_________，也可采用斐林試劑檢測(cè)________的增加。

（2）在A3的分離過(guò)程中可采用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)其純度，通常會(huì)在凝膠中添加SDS，SDS的作用是___________________和___________________。

（3）本實(shí)驗(yàn)中，研究人員在確定A3的最適pH時(shí)使用了三種組分不同的緩沖系統(tǒng)，結(jié)果如圖所示。某同學(xué)據(jù)圖判斷，緩沖系統(tǒng)的組分對(duì)酶活性有影響，其判斷依據(jù)是______________。

（4）在制備A3的固定化酶時(shí)，一般不宜采用包埋法，原因是___________________________ （答出1 點(diǎn)即可）。

Answer 1

【答案】碘液 還原糖（或答：葡萄糖） 消除蛋白質(zhì)所帶凈電荷對(duì)遷移率的影響 使蛋白質(zhì)發(fā)生變性 在pH相同時(shí)，不同緩沖系統(tǒng)條件下所測(cè)得的相對(duì)酶活性不同 酶分子體積小，容易從包埋材料中漏出

【解析】

SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳原理：在離子強(qiáng)度低時(shí)，主要以單體形式存在的SDS可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，生成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物。由于SDS帶有大量負(fù)電荷，復(fù)合物所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)蛋白質(zhì)原有的負(fù)電荷，這使得不同蛋白質(zhì)間電荷的差異被掩蓋。而SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物形狀都呈橢圓棒形，棒的長(zhǎng)度與蛋白質(zhì)亞基分子量有關(guān)，所以在SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白只存在分子大小的差別，利用這一點(diǎn)可將不同的蛋白質(zhì)分開(kāi) （分子篩效應(yīng)），因此SDS-PAGE常用于檢測(cè)蛋白質(zhì)亞基的分子量及鑒定純度。

（1）測(cè)定酶活性時(shí)，可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)物的減少或生成物的增加來(lái)反映酶活性，所以可以用碘液檢測(cè)淀粉的減少，也可用斐林試劑檢測(cè)還原糖（或葡萄糖）的增加。

（2）鑒定蛋白質(zhì)純度常用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法，凝膠中加入SDS可以消除蛋白質(zhì)所帶凈電荷對(duì)遷移率的影響，并使蛋白質(zhì)發(fā)生變性。

（3）分析題中曲線可知，在pH相同時(shí)，不同緩沖系統(tǒng)條件下所測(cè)得的相對(duì)酶活性不同，可推測(cè)緩沖系統(tǒng)的組分對(duì)酶活性有影響。

（4）由于酶分子體積小，容易從包埋材料中漏出，所以固定化酶時(shí)，一般不采用包埋法。