Question

【題目】苯丙酮尿癥是由P基因突變引起的，科研人員將正常P基因定點整合到P基因突變的小鼠胚胎于細胞的染色體DNA上，替換掉突變基因，治愈了老鼠的苯丙酮尿癥（如圖）。該技術有望在人類疾病的治療上取得預期效果。請回答下列問題：

（1）構建含P基因的重組載體時，常用的工具酶是____；已知含neo‘的細胞具有G418（一種抗生素）的抗性，可見重組載體中的neor是 ____。

（2）常用____法將重組載體導入小鼠胚胎干細胞，將重組載體導入胚胎干細胞的原因是胚胎干細胞能大量增殖，且____。

（3）若從小鼠的早期胚胎中獲取胚胎干細胞，可以從 ___中獲取；要使貼壁生長的胚胎干細胞從瓶壁上脫落，可用____酶處理。

（4）利用neor等篩選出胚胎干細胞，將篩選出的胚胎干細胞培育成小鼠，還需通過檢測小鼠體內 ___的含量，進行個體生物學水平的檢測。

Answer 1

【答案】限制酶和DNA連接酶 標記基因 顯微注射 具有發(fā)育的全能性 桑椹胚或囊胚的內細胞團 胰蛋白酶或膠原蛋白 苯丙酮酸

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣，將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術，個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）構建含P基因的重組載體時，常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶；含neor的細胞具有G418的抗性，推測重組載體中的neor是標記基因，利于目的基因的檢測與鑒定。

（2）將目的基因導入動物細胞，常用顯微注射法。胚胎干細胞能大量增殖，且具有發(fā)育的全能性，轉基因的胚胎干細胞可培育成轉基因的新個體。

（3）胚胎干細胞可以從原始性腺或早期胚胎中獲取，桑椹胚或囊胚的內細胞團細胞都具有發(fā)育的全能性，屬于胚胎干細胞。要使貼壁生長的胚胎干細胞從瓶壁上脫落，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理。

（4）對轉基因小鼠進行個體生物學水平的檢測時，可以通過檢測小鼠體內苯丙酮酸的含量來完成。