Question

【題目】普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）,能在纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)，產(chǎn)生的β-甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短，為了培養(yǎng)新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入棉花細(xì)胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如下，請分析回答：

（1）①和②過程中所用的限制性內(nèi)切酶分是、。
（2）基因表達(dá)載體除了圖示組成外，至少有等（至少答兩個）。
（3）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達(dá)載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶完全切割正義基因表達(dá)載體獲得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是和。
（4）④過程中利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞的過程中，整合到棉花細(xì)胞染色體DNA的區(qū)段是 ， 轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞再通過形成植物體。
（5）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而（促進(jìn)或抑制）基因的表達(dá)，其意義是。

Answer 1

【答案】
（1）HindⅢ,BamHⅠ SmaⅠ
（2）復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因等
（3）6.0kb,12.7kb
（4）（含有E6啟動子和GhMnaA2基因的）T－DNA,植物組織培養(yǎng)
（5）抑制,阻止β-甘露糖苷酶合成,使棉纖維更長
【解析】（1）纖維細(xì)胞E6啟動子前后含有限制酶HindⅢ和BamHⅠ的切割位點(diǎn)，因此可以用這兩種酶切割；②是構(gòu)建反義GhMnaA2基因表達(dá)載體的過程，反義GhMnaA2基因前后有限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)，因此可以該酶切割獲取目的基因。
（2）基因表達(dá)載體由啟動子、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)、終止子和標(biāo)記基因等部分組成。
（3）③過程中，用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正義基因表達(dá)載體獲得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是0．05kb+5．95kb=6．0kb、3．25kb+9．45kb=12．7kb。
（4）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞的過程中，整合到棉花細(xì)胞染色體DNA的區(qū)段是含有E6啟動子和GhMnaA2基因的T-DNA．轉(zhuǎn)化后，還需依據(jù)植物細(xì)胞的全能性，采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將受體細(xì)胞培養(yǎng)形成植物體。
（5）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)的翻譯過程，進(jìn)而阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纖維更長。
【考點(diǎn)精析】解答此題的關(guān)鍵在于理解基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)，以及對基因工程的應(yīng)用的理解，了解植物基因工程：抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物，利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)；動物基因工程：提高動物生長速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物；基因治療：把正常的外源基因?qū)�入病人體內(nèi)，使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用．