Question

【題目】地鐵是北京市重要的軌道交通系統(tǒng)，2018年共運送乘客31．16億人次。研究人員對地鐵設施的微生物分布情況進行了一系列調(diào)查。

（1）樣本的采集：用經(jīng)___________處理的棉簽蘸取肉湯培養(yǎng)基，在座椅、滾梯扶手等各處的接觸面來回擦拭收集樣品。所有樣品采集完后，均儲存于裝有1ml肉湯培養(yǎng)基的離心管里。

（2）細菌總數(shù)的測定：將儲存在離心管中的樣品___________后吸取100μL樣品注入盛有900μL___________的離心管中，制成10l稀釋倍數(shù)樣品。按照相同的方法，制備系列稀釋樣品勻液，涂布接種在___________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基上，置于___________中培養(yǎng)48h后計數(shù)。

（3）細菌的分離和純化：用___________蘸取離心管中樣品，劃線接種到瑪嘉尿道定位顯色培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后深藍色菌落即為大腸桿菌。其余種類微生物按說明書挑取對應顏色的菌落。瑪嘉尿道定位顯色培養(yǎng)基是具有___________(填“選擇”或“鑒別”)作用的培養(yǎng)基。

（4）各種耐藥菌的分離鑒定：將603份樣本在添加相應抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)后共得到154株菌株，具體結果如下

采樣點	樣本類型	樣本數(shù)	分離出耐藥菌的樣本數(shù)	分離率
地鐵車廂	扶手	216	73	33．80%
	座椅	216	43	19．91%
	門把手	72	26	36．11%
地鐵外環(huán)境	自動售票機	17	5	29．41%
	滾梯扶手	42	4	9．52%
地鐵衛(wèi)生間	洗手臺	20	3	15．00%
	衛(wèi)生間門	20	0	0．00%

(注：分離率=分離出耐藥菌的樣本數(shù)/樣本數(shù)×100%)

請比較3個采樣點的耐藥菌分離率情況，并分析造成3個采樣點分離率存在差異的可能原因。__________。

Answer 1

【答案】滅菌 振蕩均勻 無菌水 固體 恒溫培養(yǎng)箱 接種環(huán) 鑒別 分離率比較：地鐵車廂>地鐵外環(huán)境>地鐵衛(wèi)生間；原因地鐵衛(wèi)生間的分離率最低的原因：有專人打掃，清潔頻率高等；地鐵車廂的分離率最高的原因：車廂相對封閉，空氣不流通，人員密集，地鐵線路長導致打掃頻次低等。地鐵外環(huán)境分離率居中的原因：封閉程度打掃頻率介于兩者之間

【解析】

1、稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落.由于兩個或多個細胞連在一起，觀察到的只是一個菌落，因此其統(tǒng)計的數(shù)值往往比實際數(shù)目偏低。

2、培養(yǎng)基按功能分有選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產(chǎn)生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

（1）樣本的采集：用經(jīng)滅菌處理的棉簽蘸取肉湯培養(yǎng)基，在座椅、滾梯扶手等各處的接觸面來回擦拭收集樣品。

（2）細菌總數(shù)的測定：將儲存在離心管中的樣品震蕩均勻后吸取100μL樣品注入盛有900μL無菌水的離心管中，制成10l稀釋倍數(shù)樣品。按照相同的方法，制備系列稀釋樣品勻液，涂布接種在固體培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后計數(shù)。

（3）細菌的分離和純化：用接種環(huán)蘸取離心管中樣品，劃線接種到瑪嘉尿道定位顯色培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后深藍色菌落即為大腸桿菌。其余種類微生物按說明書挑取對應顏色的菌落。故瑪嘉尿道定位顯色培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。

（4）由表格數(shù)據(jù)可知，3個采樣點的耐藥菌分離率比較為地鐵車廂>地鐵外環(huán)境>地鐵衛(wèi)生間。原因地鐵衛(wèi)生間的分離率最低的原因：有專人打掃，清潔頻率高等；地鐵車廂的分離率最高的原因：車廂相對封閉，空氣不流通，人員密集，地鐵線路長導致打掃頻次低等。地鐵外環(huán)境分離率居中的原因：封閉程度打掃頻率介于兩者之間。