Question

【題目】如圖是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)干擾素的簡化流程�；卮鹣铝袉栴}：

（1）進(jìn)行過程I的前提是要根據(jù)干擾素基因的____________設(shè)計(jì)引物。

（2）過程I需加熱至90~95℃，然后冷卻至55~60℃，如此操作的目的是____________。據(jù)圖可知欲獲得干擾素基因，至少需要復(fù)制____________次。

（3）圖中A的名稱是___________，A上與RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位稱為___________。

（4）為檢測干擾素基因在酵母菌細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄，可用_____________作探針，與從細(xì)胞中提取的____________進(jìn)行分子雜交。

Answer 1

【答案】核苷酸序列 使DNA解鏈，然后使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上 3 重組質(zhì)粒 啟動子 放射性同位素、生物素或熒光染料等標(biāo)記的干擾素（目的）基因 mRNA

【解析】

1.基因工程的基本操作程序：第一步：目的基因的獲��；第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建；第三步：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；第四步：目的基因的檢測和表達(dá)。

2.PCR的過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開。

3.題圖Ⅰ是利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，Ⅱ是構(gòu)建基因表達(dá)載體，Ⅲ是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到酵母菌細(xì)胞中。

（1）PCR的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對引物，因此進(jìn)行過程Ⅰ的前提是要根據(jù)干擾素基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物。

（2）PCR過程中需加熱至9095℃，然后冷卻至5560℃，如此操作的目的是使DNA解旋，然后使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上。根據(jù)PCR復(fù)制的特點(diǎn)，結(jié)合圖示可知，圖示中干擾素基因的兩條鏈應(yīng)是第二次復(fù)制才能形成的子鏈，所以至少需要復(fù)制三次才能形成圖中的干擾素基因。

（3）圖中A是干擾素基因和質(zhì)粒連接形成的重組質(zhì)粒（基因表達(dá)載體），A上與RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位稱為啟動子。

（4）基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物為mRNA，由于轉(zhuǎn)錄過程中遵循堿基互補(bǔ)配對原則，所以為檢測干擾素基因在酵母菌細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄，可用放射性同位素、生物素或熒光染料等標(biāo)記的干擾素（目的）基因作探針，與從細(xì)胞中提取的mRNA進(jìn)行分子雜交。