Question

【題目】科學(xué)家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進(jìn)行重組，并在大腸桿菌中成功表達(dá)。下圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請(qǐng)據(jù)圖回答問題：

(1)步驟①和②中常用的工具酶是________________和________________。

(2)經(jīng)過①和②步驟后，有些質(zhì)粒上的________________基因內(nèi)插入了外源目的基因，形成重組質(zhì)粒。

(3)步驟③是________________的過程。為了促進(jìn)該過程，應(yīng)該用________處理大腸桿菌。

(4)步驟④是將三角瓶?jī)?nèi)的大腸桿菌接種到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基A上培養(yǎng)，目的是篩選________________。能在A中生長(zhǎng)的大腸桿菌有________種。

(5)步驟⑤是用無菌牙簽挑取A上的單個(gè)菌落，分別接種到B(含氨芐青霉素和四環(huán)素)和C(含四環(huán)素)兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上。一段時(shí)間后，菌落的生長(zhǎng)狀況如上圖所示。含有目的基因的菌落位于(填“B”或“C”) ________上，請(qǐng)?jiān)趫D中相應(yīng)位置上圈出來。

__________

Answer 1

【答案】（1）限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶

（2）氨芐青霉素抗性

（3）將重組質(zhì)粒（目的基因）導(dǎo)入大腸桿菌（受體細(xì)胞） CaCl2溶液

（4）含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌 2種

（5）E （圈兩個(gè)菌落2分）

【解析】試題分析：

（1）步驟①表示用限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段，步驟②表示用DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒連接起來。

（2）由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨芐青霉素抗性基因中。

（3）步驟③表示將重組質(zhì)粒（目的基因）導(dǎo)入大腸桿菌（受體細(xì)胞）；為了促進(jìn)該過程，應(yīng)該用CaCl2溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

（4）培養(yǎng)基C是選擇培養(yǎng)基，其中含有四環(huán)素，專一篩選含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌；能在C中生長(zhǎng)的大腸桿菌有2種，分別是抗四環(huán)素和同時(shí)抗四環(huán)素和抗氨芐青霉素的大腸桿菌。

（5）D培養(yǎng)基中大腸桿菌對(duì)四環(huán)素和氨芐青霉素都有抗性，而E中的大腸桿菌只抗一種四環(huán)素，所以在E中對(duì)應(yīng)區(qū)域（D中沒有菌落的部位），該處為轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。